多肽合成是一個固相合成順序順序一般從C端(羧基端)向N端(氨基端)合成。過去的多肽合成是在溶液中進行的稱為液相合成法。從1963年Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來,經(jīng)過不斷的改進和完善,到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個常用技術(shù),表現(xiàn)出了經(jīng)典液相合成法*的優(yōu)點,從而大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。多肽合成總的來說分成兩種:固相合成和液相多肽合成。
多肽合成技術(shù)
Merrifield*提出了固相多肽合成方法(SPPS)以來,此技術(shù)的優(yōu)勢受大眾青睞,所以目前大眾比較長使用的多肽合成技術(shù)手段就是固相合成技術(shù)。固相合成肽技術(shù)是液相合成肽技術(shù)的升華。液相合成技術(shù),也可進行多肽的合成,通常此方法會導(dǎo)致消旋的副反應(yīng),或在強堿存在時形成5(4H)-oxaylones和N-acylurea而受到影響。慶幸地是,這些副反應(yīng)能*小化,但是還不能*消除。
固相多肽合成原理
1963年,Merrifield提出了固相多肽合成方法,由于其合成方便,迅速,成為多肽合成的**方法,而且?guī)砹硕嚯挠袡C合成上的一次革命,并成為了一支獨立的學(xué)科——固相有機合成,固相合成的發(fā)明同時促進了肽合成的自動化。
例如,國肽生物多肽合成主要是采用Fmoc合成法。Fmoc合成法采用Fmoc為α-氨基的保護基,側(cè)鏈保護采用芐醇類。合成時將一個Fmoc-氨基酸衍生物共價交聯(lián)到樹脂上,用堿脫除Fmoc,用三乙胺中和游離的氨基末端,然后通過DCC活化、偶聯(lián)下一個氨基酸,脫保護多采用HF法或TFMSA(三氟甲磺酸)法。
多肽合成服務(wù)種類
多肽合成服務(wù)通常有線性肽合成服務(wù)、多種難肽合成服務(wù)、修飾肽合成服務(wù)、以及部分多肽合成公司還會提供多肽定制服務(wù),定制出有針對性的合成肽。
目前有多肽合成公司提供的線性肽合成可達150個氨基酸,在修飾肽合成上,能提供常見修飾,磷酸化(Ser/Thr/Tyr),環(huán)化(酰胺環(huán)/二硫鍵環(huán)),熒光標(biāo)記(5(6)-FAM,F(xiàn)ITC,CY5,RhodamineB,PNA,EDNAS/dabcyl等),生物素標(biāo)記(Biotin,Lys(Biotin))/復(fù)合抗原(MAP)/含D型氨基酸,及各種氨基酸衍生物均可合成。
多肽產(chǎn)物純度選擇
常見的質(zhì)譜級多肽純度,一般要求>95%
用于抗體篩選純度,一般>85%即可
NMR和結(jié)晶試驗中,純度一般>98%
粗品肽,一般>50%即可用于多肽篩選
多肽
多肽是一種與生物體內(nèi)各種細(xì)胞功能都相關(guān)的生物活性物質(zhì),它的分子結(jié)構(gòu)介于氨基酸和蛋白質(zhì)之間,是由多種氨基酸按照一定的排列順序通過肽鍵結(jié)合而成的化合物。多肽是涉及生物體內(nèi)各種細(xì)胞功能的生物活性物質(zhì)的總稱,常常被應(yīng)用于功能分析、抗體研究、尤其是藥物研發(fā)等領(lǐng)域。多肽合成技術(shù)的出現(xiàn),讓這些多肽的應(yīng)用領(lǐng)域變得更寬。
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