田鼠布魯氏菌PCR檢測試劑盒說明書

使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
注意事項：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

以下是田鼠布魯氏菌PCR檢測試劑盒說明書的相關(guān)產(chǎn)品：

牛蒡子苷;牛蒡苷 英文名稱：Arctiin; Niu Banggan 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光

牛蒡子苷元；牛蒡子苷元 英文名稱：Arctigenin; arctigenin 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光

補骨脂定 英文名稱：Psoralidin 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光

補骨脂酚；破故紙酚 英文名稱：Bakuchiol bakuchiol; 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光

補骨脂二氫黃酮；補骨脂甲素；補骨脂黃酮 英文名稱：Psoralen two hydrogen flavones; corylifolin; flavonoids from Psoralea corylifolia 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光

補骨脂乙素；異補骨脂酮；異補骨脂查耳酮 英文名稱：Corylifolinin; isopsoralen chalcone ketone; isopsoralen 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光

補骨脂二氫黃酮、甲基補骨脂黃酮A;補 英文名稱：Psoralen two hydrogen flavone ether, bavachinin A; complement 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光

異補骨脂二氫黃酮 英文名稱：Isopsoralen two hydrogen flavones 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光

新補骨脂異黃酮 英文名稱：Neobavaisoflavone 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光

花椒毒酚；8-羥基補骨脂素 英文名稱：Xanthotoxol; 8- hydroxy psoralen 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光

異佛手柑內(nèi)酯 英文名稱：Isobergapten 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光

佛手柑內(nèi)酯；香柑內(nèi)酯，5-甲氧基補骨脂素 英文名稱：Bergamot Orangene; bergapten, 5- methoxy psoralen 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光

常春藤皂苷元 英文名稱：Ivy Zao Ganyuan 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光

α－常春藤苷 英文名稱：Alpha hederin 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光

田鼠布魯氏菌PCR檢測試劑盒說明書大鼠亮氨酰氨基肽酶(LAP)ELISA Kit  Rat Leucine aminopepridase,LAP ELISA Kit

牛環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)ELISA Kit  Bovine cyclic Guanosine monophosphate,cGMP ELISA Kit

大鼠胸腺素β-4(TMSB4X)ELISA Kit  Rat Thymosin beta-4,TMSB4X ELISA kit

山羊白介素1α(IL-1α)ELISA Kit  Goat Interleukin 1α,IL-1α ELISA Kit

大鼠17-羥孕烯醇酮ELISA Kit  Rat 17-Hydroxypregnenolone ELISA Kit

雞白介素8(IL-8)ELISA Kit  Chicken Interleukin 8,IL-8 ELISA Kit

人Ca2+激活K+通道蛋白2(KCNN2)ELISA Kit  Human KCNN2 ELISA Kit

豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHCⅢ)ELISA Kit  Porcine MHC Ⅲ ELISA Kit

犬透明質(zhì)酸酶4(HAase 4)ELISA Kit  Canine Hyaluronidase 4,HAase 4 ELISA Kit

人單絲氨酸蛋白激酶1(LIMK1)ELISA Kit  Human LIMK1 ELISA Kit

猴血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA Kit  Monkey fibrinogen degradation product,FDP ELISA kit

小鼠氧化型谷胱甘肽(GSSG)ELISA Kit  Mouse oxidizided glutathione,GSSG ELISA Kit

類人猿巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA Kit  Simian Macrophage Colony-Stimulating Factor,M-CSF ELISA Kit

馬雌激素(E)ELISA Kit  Horse Estrogen(E)ELISA kit