UHPLC-MS痕量分析專用流動相溶劑
簡介
超高效液相色譜(UHPLC)可結合亞微米粒徑的色譜柱并在高壓下工作，提升了分析復雜樣品混合物的分辨率和靈敏度，提高了分 析速度。質譜(MS)可對萬億分之一級的分析物進行檢測和鑒定。超高壓液相色譜質譜聯(lián)用儀(UHPLC-MS)是分析化學中的一個強大 工具，它需要使用特純溶劑配制流動相溶液以進行痕量分析。針對UHPLC-MS的流動相我們開發(fā)了一種新級別的溶劑，它在正負 離子電離模式下基線噪音都非常低，而且金屬離子含量最少，使用光電二極管陣列檢測器全波段掃描，顯示非常低的UHPLC-UV 干擾。
| 貨號 | ||
| A956-1（乙腈，1L） | A458-1（甲醇，1L） | W8-1（水，1L） |
ATTRNAME | ATTRVALUE | ||
含量 | ≥99.9% | ≥99.9% |
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顏色 | 小于或等于5 APHA | 小于或等于5 APHA |
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鋁(Al) | 2 ppb max. | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
鈣(Ca) | 10 ppb max. | 20 ppb max. | 5 ppb max. |
鉻(Cr) | 2 ppb max. | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
銅(Cu) | 5 ppb max. | 5 ppb max. | 5 ppb max. |
鐵(Fe) | 2 ppb max. | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
鉛(Pb) | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
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鎂(Mg) | 2 ppb max. | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
錳(Mn) | 2 ppb max. | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
鎳(Ni) | 2 ppb max. | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
鉀(K) | 5 ppb max. | 5 ppb max. | 5 ppb max. |
銀(Ag) | 2 ppb max. | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
鈉(Na) | 20 ppb max | 20 ppb max | 20 ppb max |
鋅(Zn) | 2 ppb max. | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
水(H2O) | 0.01% max. | 0.02% max. |
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吸光度在190 nm | ≤1.00 AU |
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吸光度在195 nm | ≤0.15 AU |
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吸光度在200 nm | ≤0.05 AU |
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吸光度在205 nm | ≤0.04 AU |
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吸光度在210 nm | ≤0.03 AU | ≤0.5 AU | ≤0.01 AU |
吸光度在215 nm | ≤0.025 AU | ≤0.4 AU |
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吸光度在220 nm | ≤0.015 AU | ≤0.2 AU | ≤0.01 AU |
吸光度在225 nm | ≤0.015 AU |
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吸光度在230 nm | ≤0.01 AU | ≤0.1 AU | ≤0.01 AU |
吸光度在240 nm |
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| ≤0.01 AU |
吸光度在254 nm | ≤0.005 AU | ≤0.01 AU | ≤0.005 AU |
吸光度在260 nm |
| ≤0.005 AU | ≤0.005 AU |
吸光度在280 nm | ≤0.005 AU | ≤0.005 AU | ≤0.005 AU |
蒸發(fā)后殘留物 | 0.8 ppm Max. | 1 ppm Max. | ≤1ppm |
可滴定酸 | 0.008 meq/g Max | 0.0003 meq/g Max |
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可滴定堿 | 0.0006 meq/g Max | 0.0002 meq/g Max |
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UHPLC-UV梯度適用性 | ≤2 mAU - PDA (200-400 nm) | ≤2 mAU - PDA (200-400 nm) | ≤2 mAU - PDA (200-400 nm) |
UHPLC-MS梯度適用性 |
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正離子模式-無添加劑 | ≤25 ppb（如撲滅津in EIC） | ≤25 ppb（如撲滅津in EIC） | ≤25 ppb（如撲滅津in EIC） |
負離子模式-無添加劑 | ≤25 ppb（如in EIC） | ≤50 ppb（如in EIC） | ≤25 ppb（如in EIC） |
產物離子峰信噪比(MS/MS) | > 10 S/N | > 10 S/N | > 10 S/N |
蛋白酶 |
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| 未檢出 |
所有鹵素（如氯） |
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| 未檢出 |
材料和方法
•流動相：對乙腈(ACN)、甲醇和水進行了評測；三種溶劑均來自一個新的級別：Optima® UHPLC-MS，在正離子和負離子電離模式中下基線噪音都非常低。
•儀器：Thermo Scientific Accela UHPLC系統(tǒng)由自動進樣器和二極管陣列檢測器組成，連接到一個配備有電噴霧離子化接口的LTQ-XL質譜儀。
•色譜柱：Thermo Scientific Hypersil Gold™色譜柱（50毫米×2.1毫米，1.9微米），目錄號：26-102-052130。
•標準品：撲滅津（SPEX CertiPrep，S-3170，1000微克/毫升）作為正離子模式標準品，（SPEX CertiPrep，S-4032， 1000微克/毫升）作為負離子模式標準品。將這兩種標準品進行充分的電離，無需在流動相中施加任何添加劑。
•質譜儀采用從100到1500 amu的全掃描電噴霧質譜法。碰撞誘導解離(CID)質譜是利用氦氣作為碰撞氣，在特定離子分離后獲得的。氣體流量和毛細管電壓等其它參數根據需要進行調整。
•HPLC梯度：0-0.5分鐘：90%水，10%乙腈；0.5分鐘-2.0分鐘：0%水，99%乙腈；2分鐘-5分鐘：99%乙腈；后運行5.1分鐘-10分鐘：90%水，10%乙腈。
•流速：水/乙腈體系為0.6 mL/min，水/甲醇體系為0.5 mL/min。
•進樣量：5 µL。
結果
•通過結合UHPLC-MS靈敏度和正負離子模式下標準品的痕量分析來評測流動相溶劑的純度（圖1-10）。 為評估全掃描ESI-MS和CID生成的產物離子中的干擾基線峰，使用撲滅津作為正離子模式標準品（圖3-6），使用作為負離子模式標準品（圖7-10）。
討論
• 圖1圖2表示水/乙腈和水/甲醇在PDA，UV及質譜中的空白對照。兩個溶劑系統(tǒng)中都沒有觀測到多余的峰。
• 采集全面數據(100-1500 amu)后，在正離子電離模式下，從水/乙腈和水/甲醇系統(tǒng)的提取離子色譜圖(EIC)中檢測到痕量級撲滅津 (10 ppb = 10 pg/µL)。在水/乙腈系統(tǒng)中，峰的信噪比顯示低于定量限(LOQ)。但是，25 pg/µL (25 ppb)的撲滅津在兩種溶劑系統(tǒng) 中都顯示S/N>10（圖3）。
• 撲滅津峰(m/z 230)的MS/MS使用了250 fg/µL (250 ppt)的分析物來完成，同時對m/z 188產物離子的信噪比進行了監(jiān)測。在這兩 種溶劑系統(tǒng)中，撲滅津產物離子均顯示S/N>30（圖5和圖6），這與LTQ-XL離子阱質譜儀的檢測靈敏度一致。
• 在負離子電離模式下，50pg/μL (50ppb)的在乙腈和甲醇系統(tǒng)中其S/N＞10（圖7）。由于TFA (m/z 113)加合物是從系統(tǒng)中 形成，兩種溶劑系統(tǒng)都檢測到m/z435的產物離子（圖8）。
• 5 pg/µL的(5 ppb)的MS/MS生成的m/z 257產物離子其S/N>10（圖9，圖10）。
結論
• 使用新的Optima® UHPLC-MS流動相溶劑，在全掃描電噴霧質譜和CID生成的產物離子中，痕量級的撲滅津和標準品其峰 高均顯著高于背景峰。
• 監(jiān)控CID產生的產物離子峰是評估MS靈敏度的常用做法，同時我們還開發(fā)了一個類似的方法來評估流動相溶劑的純度。
• 使用水/乙腈流動相，250 ppt的撲滅津(m/z 230)生成的m/z 188的產物離子峰其S/N＞30。
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