蛋白質(zhì)復(fù)合物免疫沉淀的理想選擇:
背景值低,抗體與微珠表面共價連接,使 Dynabeads Tosylactivated 成為蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)復(fù)合物免疫沉淀(共免疫沉淀,共-IP)的選擇。溫和而快速的微珠磁性聚集和耗時極短的孵育(可能是由于快速的表面結(jié)合動力學(xué))使 Dynabeads Tosylactivated 成為極不穩(wěn)定或和/或瞬時(短暫)蛋白復(fù)合物免疫沉淀的之選。
超快速方案:
? 鑒定蛋白質(zhì)復(fù)合物成員的時間以分鐘計而非小時
? 分離時間短,足以鑒定瞬時和不穩(wěn)定復(fù)合物
? 鑒定長時間方案無法鑒定的結(jié)合伴侶
? 快速方案使已經(jīng)極低的背景結(jié)合進一步降低
? 信噪比更大
應(yīng)用:
? 蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)復(fù)合物的 IP
? 將功能性酶偶聯(lián)至微珠表面進行下游分析
? 將肽偶聯(lián)至微珠表面以鑒定結(jié)合物
純化具有以下特點的肽、蛋白質(zhì)和酶:
? 瞬時穩(wěn)定
? 結(jié)構(gòu)完整
? 溫度穩(wěn)定性差
? 具有天然構(gòu)型且功能完好
偶聯(lián)過程概要:
通過過夜孵育所選配體和 Dynabeads Tosylactivated 實現(xiàn)共價偶聯(lián)。與 Dynabeads Tosylactivated 偶聯(lián)的配體通常包括肽和蛋白質(zhì)(例如用于免疫沉淀或共免疫沉淀的抗體)。在中性至高 pH 值和 37°C 時發(fā)生偶聯(lián)。我們建議在 pH 值 8.5-9.5 的條件下進行偶聯(lián),但是對于 pH 值穩(wěn)定性差的配體,偶聯(lián)可以在 pH 值為 7.4 的其他緩沖液中進行。
配體偶聯(lián)步驟完成后,Dynabeads Tosylactivated 的實際表面包被不再具有活性,因此非特異性結(jié)合非常低。
關(guān)于 Dynabeads:
Dynabeads 是無孔單分散超順磁珠。它們在溶液中有很強的運動能力,使偶聯(lián)至微珠的配體可與全部樣品持續(xù)進行相互作用。通過將試管轉(zhuǎn)移到含有強磁場的支架(從紅欄導(dǎo)航 Brands > Dynal; ™> 磁力架),超順磁珠被吸附至管壁。強磁場將微珠快速吸附至管壁,因此可以通過吸取輕松去除全部上清液。洗滌步驟與此類似。
Dynabeads Tosylactivated 的微珠表面特性:
?對甲苯磺?;?(Tosyl) 基團
?疏水、pH 中性
?通過伯胺 (NH2) 或巰基 (SH) 基團共價結(jié)合
每毫克微珠的結(jié)合容量:
隨配體而變化(例如:5-10 µg IgG)