? 可重現(xiàn) — 檢測(cè)試劑盒的性能已使用肽消化混合物進(jìn)行嚴(yán)格檢測(cè)
? 可靠的肽消化標(biāo)準(zhǔn)品 — 試劑盒包括一種經(jīng)驗(yàn)證的肽消化標(biāo)準(zhǔn)品,可提高定量的可重現(xiàn)性
? 兼容 — 可與多種試劑配合使用,包括 MS 樣品制備試劑和 TMT 標(biāo)記肽(熒光測(cè)定)
? 方便 — 簡(jiǎn)單的混合讀取形式,在短短5分鐘(熒光法)或15分鐘(比色法)內(nèi)便可讀到穩(wěn)定信號(hào)
Pierce 定量比色肽檢測(cè)試劑盒提供了改良的 BCA 試劑(用于將 Cu+2 還原為 Cu+1)、經(jīng)優(yōu)化的專有螯合劑(用于定量肽混合物)以及肽消化參考標(biāo)準(zhǔn)品(用于生成對(duì)照線性標(biāo)準(zhǔn)曲線)。這款比色肽檢測(cè)試劑盒只需少量樣品 (20 µL),且工作肽濃度范圍為 25–1000 μg/mL。在反應(yīng)中,先在堿性條件下通過肽的酰胺主鏈還原銅(雙縮脲反應(yīng)),隨后,還原的銅與螯合物結(jié)合形成明亮的紅色復(fù)合物(吸收波長(zhǎng)為 480 nm),在短短15分鐘內(nèi)便可讀取到該復(fù)合物。該反應(yīng)產(chǎn)生的信號(hào)比用于肽分析的 Micro-BCA 蛋白檢測(cè)試劑盒靈敏 3–4 倍。比色肽檢測(cè)試劑盒與 TMT 標(biāo)記肽兼容,但不建議用于合成肽,因?yàn)樵摍z測(cè)試劑盒會(huì)受到肽氨基酸含量的影響。
Pierce 定量熒光肽檢測(cè)試劑盒的試劑包括肽測(cè)定緩沖液、熒光肽標(biāo)記試劑以及用于肽濃度定量測(cè)定的肽消化測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品。這款靈敏的檢測(cè)試劑盒僅需 10 µL 樣品,會(huì)隨著肽濃度增加 (5–1000 μg/mL) 而產(chǎn)生線性響應(yīng),并且可生成在短短5分鐘內(nèi)便能檢測(cè)到的穩(wěn)定最終熒光。在此檢測(cè)試劑盒中,使用胺反應(yīng)性熒光試劑(直到與肽反應(yīng)才會(huì)發(fā)出熒光)在肽的氨基末端添加了特異性標(biāo)記。在微孔板讀數(shù)儀 (ex390/em475) 上檢測(cè)熒光標(biāo)記的肽。該檢測(cè)試劑盒適用于定量測(cè)定肽消化混合物和氨基末端未封閉的合成肽。熒光檢測(cè)試劑盒與 TMT 標(biāo)記肽不兼容。
Thermo Scientific 肽消化測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品旨在用作與 Pierce 定量熒光和比色肽檢測(cè)試劑配合使用的參考標(biāo)準(zhǔn)品,以提高肽定量的可重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性。肽消化測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品以濃度為 1 mg/mL 的即用型液體規(guī)格提供。已使用 MS 級(jí)消化參考蛋白,以盡量減少缺失的切割。為確保性能一致,監(jiān)測(cè)蛋白的酶切效率以確保批間一致性,并通過與參比標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較來評(píng)估質(zhì)量。
應(yīng)用
? 對(duì)樣品濃度進(jìn)行歸一化,以便用于下游定量應(yīng)用
? 對(duì)上樣量進(jìn)行歸一化,以便用于 LC、MS 和 LC/MS 應(yīng)用
? 在肽純化步驟后測(cè)量回收率