單體親和素瓊脂糖的特點(diǎn):
•非變性—使用溫和洗脫條件純化化產(chǎn)物(2 mM 游離)
• 可重復(fù)使用—單體親和素瓊脂糖可至少再生和重復(fù)使用 10 次,并且在結(jié)合能力方面僅出現(xiàn)邊際損失(每次再生約降低 2.5 %)
• 特異性—保留結(jié)合特異性和較低的天然親和素非特異性結(jié)合
• 靈活—在各種生理緩沖液中結(jié)合樣品,并使用 0.1M 或與 2 mM 競爭洗脫
• 良好的結(jié)合能力—超過 1.2 mg 化 BSA/mL 樹脂
固定化的單體親和素蛋白能夠結(jié)合高特異性和中等親和力的,使得非分子可以被洗去,然后在磷酸鹽 (PBS) 中使用 2 mM 對(duì)已結(jié)合的標(biāo)記分子進(jìn)行競爭洗脫。該技術(shù)為化蛋白純化提供較溫和的洗脫條件,避免了與傳統(tǒng)親和素或鏈霉親和素方法相關(guān)的污染和其他問題。然后,可以使用 0.1M 再生單體親和素色譜柱以去除殘留結(jié)合的色譜柱,而不喪失與另一化樣品結(jié)合的能力。
使用典型的親和素或鏈霉親和素,結(jié)合親和力 (Kd = 10-15M) 非常大,以至于使用這些傳統(tǒng)培養(yǎng)基進(jìn)行純化需要變性洗脫條件,如 pH 為 1.5 的 8M 胍·HCl,或在還原性 SDS-PAGE 樣品上樣緩沖液中進(jìn)行煮沸。除了對(duì)化的相關(guān)蛋白的不良影響外,這些苛刻的洗脫條件通常也會(huì)引起無關(guān)的蛋白(即親和素或鏈霉親和素亞單元)從樹脂中剝離并與所需的純化產(chǎn)物共洗脫。相比之下,當(dāng)親和素偶聯(lián)到樹脂(例如交聯(lián)微珠狀瓊脂糖或 UltraLink 樹脂)作為亞單元單體時(shí),其對(duì)的特異性保留,但其結(jié)合親和力降低到有利于后續(xù)洗脫的水平 (Kd = 10-8M)。
相關(guān)產(chǎn)品
Pierce™ 單體親和素瓊脂糖試劑盒,2 mL
Pierce™ 單體親和素 UltraLink™ 樹脂