產(chǎn)品簡介
紅細(xì)胞裂解液江苑生物（Red Blood Cell Lysis Buffer，或稱ACK Lysis Buffer），是一種經(jīng)典的用于從人或鼠等的血液或組織樣品中去除無核紅細(xì)胞的裂解液，幾乎不損傷淋巴細(xì)胞（lymphocyte）或其它有核細(xì)胞。本產(chǎn)品是利用細(xì)胞內(nèi)滲透壓濃度差而導(dǎo)致細(xì)胞膜脹破的原理裂解紅細(xì)胞。主要成分包含氯化銨、碳酸氫鉀、Na2EDTA。因銨根離子無法通過細(xì)胞膜，而其他離子可以通過，造成細(xì)胞內(nèi)外的離子濃度差異，外部水分?jǐn)U散至細(xì)胞內(nèi)，使紅細(xì)胞膨脹，達(dá)到裂解效果。
經(jīng)紅細(xì)胞裂解液裂解得到的組織細(xì)胞中不含紅細(xì)胞，可進(jìn)一步用于淋巴細(xì)胞的分離純化、原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、流式細(xì)胞分析、核酸與蛋白的提取等。本裂解液適用于人，大小鼠等哺乳動物新鮮血液，不適用于有核紅細(xì)胞的裂解，例如鳥或禽類的紅細(xì)胞。本產(chǎn)品經(jīng)過無菌處理。
保存條件
常溫配送。4 oC保存，1年有效。
注意事項(xiàng)
1．本產(chǎn)品為無菌試劑，使用時請注意無菌操作，避免細(xì)菌污染。
2．通常情況下，血液樣品與紅細(xì)胞裂解液按1:3比例裂解，對一些特殊病例如白血病、紅細(xì)胞增多癥等，建議采用1:4或更高比例以保證結(jié)果。
3．在離心洗滌后，如發(fā)現(xiàn)極微量的紅細(xì)胞，可繼續(xù)試驗(yàn)，不會影響后續(xù)檢測。
4．本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究，不得用于臨床診斷和治療，不得用于食品和藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
5．為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明
對于組織細(xì)胞樣本：
1．新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理，通過適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液，離心棄上清。
2．加入3-5倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2 min。例如細(xì)胞沉淀的體積為1 mL，則加入3-5 mL的紅細(xì)胞裂解液。本步驟在室溫或4℃操作均可。
3．400-500 g離心5 min，棄紅色上清。4oC離心效果更佳。
4．如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
5．洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500 g離心2-3 min，棄上清?？稍僦貜?fù)1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀體積的5倍。4oC離心效果更佳。
6．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
對于組織細(xì)胞樣本無需洗滌的快速操作：
1．新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理，通過適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液，離心棄上清。
2．對于0.2 mL細(xì)胞沉淀加入1 mL紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2 min。本步驟在室溫或4oC操作均可。
3．加入15-20 mL PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，混勻。
4．400-500 g離心5 min，棄紅色上清。4oC離心效果更佳。
5．如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
6．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
說明：對于常規(guī)步驟，多一步洗滌過程中的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。
對于血液樣本：
1．取新鮮抗凝血，400-500 g離心5 min，棄上清。
2．加入6-10倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2 min。例如細(xì)胞沉淀的體積為1 mL，則加入6-10 mL的紅細(xì)胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對于鼠的血液，裂解1-2 min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至4-5 min，并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。
3．400-500 g離心5 min，棄紅色上清。 4oC離心效果更佳。
4．如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
5．洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500 g離心2-3 min，棄上清?？稍僦貜?fù)1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀體積的5倍。4oC離心效果更佳。
6．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注意：對于微量或少量的血液樣品，可以在步中不進(jìn)行離心棄上清的操作，直接在第二步中加入10倍血液體積的紅細(xì)胞裂解液，并在室溫或4oC裂解4-5 min。對于鼠的血液，裂解4-5 min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10 min，但通常不宜超過15 min，并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。后續(xù)步驟相同。
對于血液樣本無需洗滌的快速操作：
1．每1 mL新鮮抗凝血中加入10 mL紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解4-5 min。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對于鼠的血液，裂解4-5 min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10 min，但通常不宜超過15 min，并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。
2．加入20-30 mL PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，混勻。
3．400-500 g離心5 min，棄紅色上清。4oC離心效果更佳。
4．如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
說明：對于常規(guī)步驟，多一步洗滌過程的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。
紅細(xì)胞裂解液江苑生物
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