高通量細胞計數(shù)儀的基本原理是將待檢樣品通過流式系統(tǒng)連續(xù)傳送到光學檢測區(qū)域,采用一定的探測器對細胞進行激發(fā)并測量細胞在不同光學參數(shù)下的特性。具體步驟如下:
1.激發(fā)光源:使用激光或LED等光源產(chǎn)生單一或多種波長的光。這些光將通過光束整形系統(tǒng),使其獲得理想的光束形狀。
2.樣品注射:樣品通常被稀釋并加入試劑,以保證細胞在流動時不會黏連在一起。樣品通過注射器被注入到裝有緩沖液的注射器中,并通過壓力控制一定的流速。
3.水平排列:通過加速流體以及流體的層流自動調(diào)整,使細胞在流動時保持單個、水平排列的狀態(tài),方便激發(fā)光的入射和測量。
4.激發(fā)和測量:選擇特定的濾光片、光柵和透鏡組合來引導激發(fā)光通過細胞,并測量光的散射、發(fā)射、吸收等特性。激發(fā)光在細胞表面相互作用并發(fā)生散射或激發(fā)產(chǎn)生熒光。根據(jù)光的強度、散射角度、發(fā)射光的波長等參數(shù),可以推斷細胞的大小、形狀、顏色等信息。
5.數(shù)據(jù)處理:收集到的數(shù)據(jù)將被發(fā)送到計算機進行處理。計算機根據(jù)設定的閾值和標準,對細胞進行計數(shù)、分類和分析。各種特征數(shù)據(jù)可以通過軟件進行可視化顯示和輸出。
高通量細胞計數(shù)儀的應用:
1.細胞培養(yǎng)過程中,監(jiān)測細胞的生長情況和濃度變化。
2.通過細胞計數(shù),可以估算細胞的增殖速度、存活率以及死亡率等。
3.評估藥物對細胞的影響,如細胞毒性測試、細胞增殖抑制實驗等。
4.臨床樣本的細胞計數(shù)和鑒定,如血液檢測、尿液分析等。
5.評估病菌或微生物的濃度,以判斷生物實驗室環(huán)境的安全狀況。
6.也可以用于測量植物細胞的數(shù)量以及相關參數(shù),如細胞體積等。
總的來說,高通量細胞計數(shù)儀在生命科學的研究和實驗中有著廣泛的應用,可以快速、準確地計數(shù)大量細胞,并為研究提供可靠的數(shù)據(jù)基礎。
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