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蛋白酵母表達(dá)系統(tǒng)兼具部分原核蛋白表達(dá)特征(培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單、生長(zhǎng)速度快、表達(dá)水平高、操作簡(jiǎn)便)和部分真核蛋白表達(dá)特征(蛋白翻譯后能進(jìn)行正確加工、修飾,合理的空間折疊)。重組蛋白酵母表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:重組蛋白既可以分泌形式又可以非分泌形式在酵母系統(tǒng)中表達(dá),且能高水平表達(dá),達(dá)到5g/L;
酵母表達(dá)載體亞克隆 | *密碼子優(yōu)化,基因合成(或客戶提供質(zhì)粒模板:目的基因擴(kuò)增) *將目標(biāo)基因亞克隆到合適的表達(dá)質(zhì)粒上,可提供表達(dá)載體,如pPICZaA 、pGAPZaA、pPIC9K *拼接序列驗(yàn)證:測(cè)序 *交付:正確構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒,含重組質(zhì)粒的DH5α菌株及測(cè)序原始報(bào)告 | 1-2周 |
酵母表達(dá)菌株轉(zhuǎn)化 | *可提供表達(dá)菌株:X33,GS115,釀酒酵母等。 *擴(kuò)增培養(yǎng)5-10個(gè)陽(yáng)性克隆并進(jìn)行重組蛋白誘導(dǎo)表達(dá) *SDS-PAGE交付:陽(yáng)性克隆菌株及表達(dá)篩選結(jié)果報(bào)告。 | 2周 |
酵母表達(dá)菌株篩選 | *檢測(cè)重組蛋白表達(dá)情況(適用于多拷貝數(shù)和高表達(dá)菌株) *交付:陽(yáng)性克隆菌株及表達(dá)篩選結(jié)果報(bào)告。 | 2周 |
酵母表達(dá)菌株表達(dá)優(yōu)化 | 對(duì)挑選出來(lái)的單克隆菌株,優(yōu)化培養(yǎng)及誘導(dǎo)條件(培養(yǎng)基,菌體密度,甲醇濃度,誘導(dǎo)時(shí)間等),提高目標(biāo)蛋白的表達(dá)量 | 2周 |
小規(guī)模蛋白表達(dá)及純化 | *1L發(fā)酵液通過(guò)親和,離子交換,疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。 *SDS-PAGE交付:重組蛋白0.02-3mg及純化報(bào)告??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶?biāo)簽(Tag)或切除純化標(biāo)簽(Tag)的最終蛋白,純度>85%。 | 2-3周 |
大規(guī)模蛋白表達(dá)及純化 | 10L,30L,80L,130L,500L發(fā)酵規(guī)模 | |
增值服務(wù) | *通過(guò)HPLC,質(zhì)譜等方法詳細(xì)檢測(cè)目標(biāo)蛋白的質(zhì)量。 *蛋白質(zhì)N端測(cè)序:PPSQ31(Edman降解法測(cè)序儀) | 1-2周 |
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