生物安全柜

生物安全柜是為操作原代培養(yǎng)物、菌毒株以及診斷性標(biāo)本等具有感染性的實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，用來保護(hù)操作者本人、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境以及實(shí)驗(yàn)材料，使其避免暴露于上述操作過程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物而設(shè)計(jì)的。

生物安全柜可分為一級(jí)、二級(jí)和三級(jí)三大類以滿足不同的生物研究和防疫要求。

一級(jí)生物安全柜可保護(hù)工作人員和環(huán)境而不保護(hù)樣品。氣流原理和實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)櫥一樣，不同之處在于排氣口安裝有HEPA過濾器。所有類型的生物安全柜都在排氣和進(jìn)氣口使用HEPA過濾器。一級(jí)生物安全柜本身無風(fēng)機(jī)，依賴外接通風(fēng)管中的風(fēng)機(jī)帶動(dòng)氣流，由于不能對(duì)試驗(yàn)品或產(chǎn)品提供保護(hù)，目前已較少使用。

是目前應(yīng)用***為廣泛的柜型。 與Ⅰ級(jí)生物安全柜一樣，也有氣流流入前窗開口，被稱作“進(jìn)氣流”，用來防止在微生物操作時(shí)可能生成的氣溶膠從前窗逃逸。與Ⅰ級(jí)生物安全柜不同的是，未經(jīng)過濾的進(jìn)氣流會(huì)在到達(dá)工作區(qū)域前被進(jìn)風(fēng)格柵俘獲，因此試驗(yàn)品不會(huì)受到外界空氣的污染。 的一個(gè)之處在于經(jīng)過HEPA過濾器過濾的垂直層流氣流從安全柜頂部吹下，被稱作“下沉氣流”。下沉氣流不斷吹過安全柜工作區(qū)域，以保護(hù)柜中的試驗(yàn)品不被外界塵?；蚣?xì)菌污染。

按照NSF49的中的規(guī)定，依照入口氣流風(fēng)速、排氣方式和循環(huán)方式可分為4個(gè)級(jí)別：A1型，A2型(原B3型),B1型和B2型。所有的都可提供工作人員、環(huán)境和產(chǎn)品的保護(hù)。

A1型安全柜前窗氣流速度***小量或測量平均值應(yīng)至少為0.38m/s。70%氣體通過HEPA過濾器再循環(huán)至工作區(qū)，30%的氣體通過排氣口過濾排除。A2型安全柜前窗氣流速度***小量或測量平均值應(yīng)至少為0.5m/s。70%氣體通過HEPA過濾器再循環(huán)至工作區(qū)，30%的氣體通過排氣口過濾排除。A2型安全柜的負(fù)壓環(huán)繞污染區(qū)域的設(shè)計(jì)，阻止了柜內(nèi)物質(zhì)的泄漏。

二級(jí)B型生物安全柜均為連接排氣系統(tǒng)的安全柜。連接安全柜排氣導(dǎo)管的風(fēng)機(jī)連接緊急供應(yīng)電源，目的在斷電下仍可保持安全柜負(fù)壓，以免危險(xiǎn)氣體泄漏如實(shí)驗(yàn)室。其前窗氣流速度***小量或測量平均值應(yīng)至少為0.5m/s(100fpm)。B1型70%氣體通過排氣口HEPA過濾器排除，30%的氣體通過供氣口HEPA過濾器再循環(huán)至工作區(qū)。B2型為****全排型安全柜，無內(nèi)部循環(huán)氣流，可同時(shí)提供生物性和化學(xué)性的安全控制。

各柜體類型性能比

三級(jí)生物安全柜是為4級(jí)實(shí)驗(yàn)室生物安全等級(jí)而設(shè)計(jì)的，是目前世界上******安全防護(hù)等級(jí)的安全柜。柜體******氣密，****全排放式，所有氣體不參與循環(huán)，工作人員通過連接在柜體的手套進(jìn)行操作，俗稱手套箱(Golve box)，試驗(yàn)品通過雙門的傳遞箱進(jìn)出安全柜以確保不受污染，適用于高風(fēng)險(xiǎn)的生物試驗(yàn)。

在允許循環(huán)化學(xué)氣體的操作條件下，可以使用外接排放管道蓋（Exhaust Collar）的A2型。排放管道蓋與一般硬管不同的是有可吸入空氣的進(jìn)氣孔；排放管道蓋與外排管道連接，然后接到一個(gè)外排風(fēng)機(jī)。排放管道蓋上的進(jìn)氣孔對(duì)于A2型通過內(nèi)置風(fēng)機(jī)保持進(jìn)氣流和下沉氣流的平衡至關(guān)重要。如果使用密封的外接風(fēng)管，進(jìn)氣流將會(huì)過強(qiáng)可能導(dǎo)致安全柜對(duì)產(chǎn)品的保護(hù)實(shí)效；而排放管道蓋上的進(jìn)氣孔可以從室內(nèi)吸入空氣，而不會(huì)影響安全柜內(nèi)的氣流平衡。此條件只適用于微量有毒化學(xué)物質(zhì)。

如果不允許循環(huán)化學(xué)氣體，則必須使用裝備硬管的B2型。由于B型安全柜不是獨(dú)立平衡系統(tǒng)，它的內(nèi)置風(fēng)機(jī)只能制造下沉氣流，安全柜依賴外排風(fēng)機(jī)制造進(jìn)氣流。這種型號(hào)的安全柜在安裝和維護(hù)時(shí)會(huì)較為復(fù)雜，因?yàn)橥馀棚L(fēng)機(jī)必須與內(nèi)置風(fēng)機(jī)保持平衡，否則將導(dǎo)致對(duì)操作人員或產(chǎn)品的安全性能的失效。

依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)

生物安全柜廣泛應(yīng)用在醫(yī)療衛(wèi)生、疾病預(yù)防與控制、食品衛(wèi)生、生物制藥，環(huán)境監(jiān)測以及各類生物實(shí)驗(yàn)室等領(lǐng)域，是保障生物安全和環(huán)境安全的重要基礎(chǔ)，屬于“民生”計(jì)量的范疇。早在30年前，生物安全柜檢測已經(jīng)在國外開展，目前主要依據(jù)歐盟或美國的標(biāo)準(zhǔn)。在國內(nèi)，目前還沒有統(tǒng)一的生物安全柜檢測國家標(biāo)準(zhǔn)，生物安全柜檢測方法十分混亂，既有建設(shè)部的標(biāo)準(zhǔn)，又有的標(biāo)準(zhǔn)，還有采用歐盟標(biāo)準(zhǔn)、美國標(biāo)準(zhǔn)或各生產(chǎn)廠的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的。

生物安全柜檢測現(xiàn)行的主要標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)有：

(1)歐盟EN 12469：2000《Biotechnology-Peformance Criteria for Microbiological Safety Cabinets》

(2)美國NSF/ANSI 49—2002《Class II(Laminar Flow) Biosafety Cabinetry》；

(3)JG 170-2005中華人民共和國建筑工業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《生物安全柜》；

(4)YY 0569-2011中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《生物安全柜》。

鑒于生物安全柜危險(xiǎn)的使用環(huán)境，在安裝時(shí)以及以后每隔一定時(shí)間，要由國家空調(diào)設(shè)備質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心的專業(yè)人員按照規(guī)定對(duì)每一臺(tái)生物安全柜的整體運(yùn)行性能進(jìn)行性能檢測，以檢查其是否符合國家及國際的性能標(biāo)準(zhǔn)******使用者的安全。生物安全柜檢測主要包括物理學(xué)檢測和生物學(xué)檢測兩個(gè)方面，根據(jù)檢測性質(zhì)可分為******檢測、后續(xù)檢測。 除生物安全柜的一年一度的常規(guī)檢測外，下列情況之一時(shí)，如安裝后、移動(dòng)后、檢修后、更換過濾器后，也必須進(jìn)行現(xiàn)場生物安全柜檢測。

優(yōu)點(diǎn)

WHO《實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊》提出，生物安全柜可以有效減少由于氣溶膠暴露所造成的實(shí)驗(yàn)室感染以及培養(yǎng)物交叉污染。生物安全柜同時(shí)也能保護(hù)工作環(huán)境。

事實(shí)上，生物安全柜更側(cè)重于保護(hù)操作人員和環(huán)境，防止操作的病原微生物擴(kuò)散造成人員傷害和環(huán)境污染。

安全級(jí)別編輯

根據(jù)生物安全防護(hù)水平的差異，生物安全柜可分為一級(jí)、二級(jí)和三級(jí)三種類型。一級(jí)生物安全柜可保護(hù)工作人員和環(huán)境而不保護(hù)樣品。其氣流原理和實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)櫥基本相同，不同之處在于排氣口安裝有HEPA 過濾器，將外排氣流過濾進(jìn)而防止微生物氣溶膠擴(kuò)散造成污染。一級(jí)生物安全柜本身無風(fēng)機(jī)，依賴外接通風(fēng)管中的風(fēng)機(jī)帶動(dòng)氣流，由于不能保護(hù)柜內(nèi)產(chǎn)品，目前已較少使用。

是目前應(yīng)用***為廣泛的柜型。按照《中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY0569-2005生物安全柜》中的規(guī)定，依照入口氣流風(fēng)速、排氣方式和循環(huán)方式可分為4 個(gè)級(jí)別：A1 型，A2 型，B1 型和B2 型。所有的都可提供工作人員、環(huán)境和產(chǎn)品的保護(hù)。

A1 型安全柜前窗氣流速度***小量或測量平均值應(yīng)至少為0.38m/s。70%氣體通過HEPA 過濾器再循環(huán)至工作區(qū)，30%的氣體通過排氣口過濾排出。

A2 型安全柜前窗氣流速度***小量或測量平均值應(yīng)至少為0.5m/s。70%氣體通過HEPA 過濾器再循環(huán)至工作區(qū)，30%的氣體通過排氣口過濾排出。

二級(jí)B型生物安全柜均為連接排氣系統(tǒng)的安全柜。連接安全柜排氣導(dǎo)管的風(fēng)機(jī)連接緊急供應(yīng)電源，目的在斷電下仍可保持安全柜負(fù)壓，以免危險(xiǎn)氣體泄漏出實(shí)驗(yàn)室。其前窗氣流速度***小量或測量平均值應(yīng)至少為0.5m/s(100fpm)。

B1 型70%氣體通過排氣口HEPA 過濾器排除，30%的氣體通過供氣口HEPA 過濾器再循環(huán)至工作區(qū)。

B2 型為****全排型安全柜，無內(nèi)部循環(huán)氣流，可同時(shí)提供生物性和化學(xué)性的安全控制，可以操作揮發(fā)性化學(xué)品和揮發(fā)性核放射物作為添加劑的微生物實(shí)驗(yàn)。

三級(jí)生物安全柜是為生物安全防護(hù)等級(jí)為4級(jí)實(shí)驗(yàn)室而設(shè)計(jì)的，柜體******氣密，工作人員通過連接在柜體的手套進(jìn)行操作，俗稱手套箱(Golve box)，試驗(yàn)品通過雙門的傳遞箱進(jìn)出安全柜以確保不受污染，適用于高風(fēng)險(xiǎn)的生物試驗(yàn)，如進(jìn)行SARS、埃博拉病毒相關(guān)實(shí)驗(yàn)等。

根據(jù)生物安全柜的強(qiáng)制性行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY0569-2005生物安全柜》規(guī)定，只有獲得國家食品頒發(fā)的三類科研注冊證的產(chǎn)品才能真正保護(hù)操作人員、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和操作樣本。

生物安全柜提供對(duì)人/樣品和環(huán)境的三重保護(hù)。

選購指南

實(shí)驗(yàn)室選擇生物安全柜時(shí)應(yīng)詳細(xì)了解從事傳染性微生物工作中的生物安全級(jí)別所包括的主要要素，根據(jù)給個(gè)人、環(huán)境、社會(huì)提供的保護(hù)情況選取不同級(jí)別的生物安全柜。

生物安全一級(jí)（BSL-1）：適合用于非常熟悉的病源，該病源不會(huì)經(jīng)常引發(fā)健康成人疾病，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員和環(huán)境潛在危險(xiǎn)小，實(shí)驗(yàn)室沒有必要和建筑物中的一般行走區(qū)分開，一般按照標(biāo)準(zhǔn)的分級(jí)生物操作在開放的實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面上開展工作。不要求一般也不使用特殊的抑制設(shè)備和設(shè)施（生物安全柜）。

生物安全二級(jí)（BSL-2）：適合于對(duì)人和環(huán)境有中度潛在危險(xiǎn)的病源。與BSL-1的區(qū)別在于：①實(shí)驗(yàn)人員均應(yīng)接受過病源處理方面的特殊培訓(xùn)，并由有資格的工作者指導(dǎo)。②進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)限制進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。③對(duì)于污染的銳器應(yīng)特別注意。④某些可能產(chǎn)生傳染性氣溶膠或飛濺物的過程應(yīng)在生物安全柜中或其他物力抑制設(shè)備中進(jìn)行，可選用Ⅰ、。

生物安全三級(jí)（BSL-3）：應(yīng)用于臨床、診斷、教學(xué)、研究或者生產(chǎn)設(shè)施，在該級(jí)別中開展有關(guān)內(nèi)源性和外源性病原的工作。若因暴露而吸入該病原會(huì)引發(fā)嚴(yán)重的可能致死的疾病。實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)在處理致病性的可能使人致死的病原方面受過專業(yè)訓(xùn)練，并由對(duì)該病原工作有經(jīng)驗(yàn)的有資格的科學(xué)工作者監(jiān)督。所有與傳染源操作有關(guān)的步驟都在生物安全柜或其他物理抑制裝置中進(jìn)行，******選用二級(jí)或二級(jí)以上生物安全柜，實(shí)驗(yàn)室需要特殊設(shè)計(jì)和施工，室內(nèi)為負(fù)壓。

生物安全四級(jí)（BSL-4）應(yīng)用于對(duì)生命有高度危險(xiǎn)的危險(xiǎn)性病原或外源性病原?？赏ㄟ^氣溶膠而致實(shí)驗(yàn)室感染或未知傳染風(fēng)險(xiǎn)，且引起致命的有關(guān)病原，應(yīng)選用三級(jí)生物安全柜及正壓，如SARS病毒對(duì)人或環(huán)境具有中度潛在危險(xiǎn)，對(duì)攜帶該病毒的患者樣本處理均應(yīng)在生物安全二級(jí)（BSL-2 ）或二級(jí)以上實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，為了對(duì)操作人員和環(huán)境及樣品均提供有效的保護(hù)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選用二級(jí)以上或全排風(fēng)式生物安全柜（B2型）。

安全水平

生物安全柜的選擇需要根據(jù)所涉及微生物試驗(yàn)品或產(chǎn)品的致命性，傳播媒介等因素，這些因素可劃分為一至四級(jí)生物安全水平(BSL)：

生物安全水平 致命性 媒介 可******性 范例

BSL-1 無或極低 液體 可以 BS*

BSL-2 一般 液體 可以 HIV

BSL-3 高 空氣 可以 TBC

BSL-4 　 空氣　 不可　 Ebola

* Bacillus subtilis (草芽孢桿菌)

被分類為生物安全水平一級(jí)和二級(jí)的微生物試驗(yàn)品或產(chǎn)品不會(huì)產(chǎn)生氣溶膠，因此在開放的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上開展工作；而對(duì)于一些可能涉及或者產(chǎn)生有害生物物質(zhì)的操作過程都應(yīng)該在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，在這些條件下******使用二級(jí)的生物安全柜。二級(jí)生物安全水平的試驗(yàn)品或產(chǎn)品是可以通過液體傳播，所以操作人員必須對(duì)于污染的銳器要特別注意?？蛻粼谶x購安全柜時(shí)，也因注意確保沒有突出的銳角，在使用時(shí)也需要每天清理工作臺(tái)面。

在三級(jí)生物安全水平的生物實(shí)驗(yàn)室中，所有與傳染源操作有關(guān)的步驟，都在二級(jí)或者三級(jí)生物安全柜中進(jìn)行，并由穿戴合適的實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行；對(duì)于四級(jí)生物安全水平，所有工作應(yīng)限制在三級(jí)生物安全柜中；假若在中進(jìn)行，必須使用裝備生命支持系統(tǒng)的一體正壓。值得特別注意的是，當(dāng)出現(xiàn)新型不明微生物時(shí)，也必須在四級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。待有充分?jǐn)?shù)據(jù)后再?zèng)Q定此種微生物或毒素應(yīng)在四級(jí)還是在較低級(jí)別的實(shí)驗(yàn)室中處理。

特殊情況

細(xì)胞毒素安全柜

如果生物試驗(yàn)中涉及了細(xì)胞毒素類藥物，例如一些化學(xué)療法藥物，這些細(xì)胞毒素類藥物有的毒性；與微生物產(chǎn)品不同的是，它們不可以被福爾馬林或過氧化氫中和。而細(xì)胞毒素安全柜是專門高毒性的細(xì)胞毒素類藥物試驗(yàn)與生產(chǎn)設(shè)計(jì)的，主要特點(diǎn)之一是可以在風(fēng)機(jī)運(yùn)行時(shí)更換HEPA過濾器，這樣負(fù)壓可以保持，確保了維修人員的安全。

在2000年5月，歐洲標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CEN)頒布了生物安全柜歐洲標(biāo)準(zhǔn)EN12469:2000，正式替代了德國DIN 12950、英國BS5726和法國NF X-44-201等歐盟成員國生物安全柜的標(biāo)準(zhǔn)，成為歐盟區(qū)域內(nèi)生物安全柜的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。

NSF49在上世紀(jì)70年代***已經(jīng)出現(xiàn)，被為目前生物安全柜領(lǐng)域***完善的標(biāo)準(zhǔn)。在2002年，ANSI/NSF49正式獲得了美國國家標(biāo)準(zhǔn)學(xué)會(huì)（American National Standard Institute,ANSI）的認(rèn)可，成為美國生物安全柜的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。

NSF/ANSI49和EN12469是目前世界上***通用的生物安全柜國際認(rèn)證，這兩種標(biāo)準(zhǔn)對(duì)安全柜性能分級(jí)、安全性能檢測都有詳細(xì)的說明和要求。安全柜標(biāo)準(zhǔn)對(duì)規(guī)范安全柜市場，保護(hù)研究人員起到重要的作用?？蛻粼谶x購生物安全柜時(shí)，除了了解安全柜各項(xiàng)性能指標(biāo)，*********快***方便鑒別安全柜安全性能的方法是了解您購買的安全柜是否獲得過以上兩項(xiàng)***主要的國際安全柜認(rèn)證。

以上兩項(xiàng)***主要的國際安全柜認(rèn)證中，***重要的是測試安全柜保護(hù)性能的微生物測試，***是使用細(xì)菌芽孢的微生物挑戰(zhàn)測試，包括以下三個(gè)方面：

1、人員保護(hù)：細(xì)菌芽孢放置在工作區(qū)域，它們將不允許從前窗逃逸；

2、產(chǎn)品保護(hù)：從工作區(qū)域外向前窗開口處釋放細(xì)菌芽孢，通過測試的安全柜將可以防止細(xì)菌芽孢進(jìn)入工作區(qū)域污染試驗(yàn)品；

3、交*感染：細(xì)菌芽孢在安全柜內(nèi)從一個(gè)位置釋放，它們將不允許落到超過20cm的臨近區(qū)域；

在微生物測試后，將可以得到安全柜的安全性能范圍圖 (Performance Envelope) ，可以明確顯示生物安全柜通過所有以上三種微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)的風(fēng)速設(shè)定點(diǎn)(Airflow setpoints)[進(jìn)氣流速率范圍和下沉氣流速率范圍]。為了確保安全柜在不同運(yùn)行狀態(tài)下的安全性，用戶有必要向廠家索取相應(yīng)型號(hào)安全柜的安全性能范圍圖。 在尋求生產(chǎn)商產(chǎn)品認(rèn)證的同時(shí)，用戶也需要注意以下事項(xiàng)：

1. 當(dāng)生產(chǎn)商聲稱自己生產(chǎn)的安全柜符合某項(xiàng)國際標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，可要求其出示證明-合法的認(rèn)證機(jī)構(gòu)所簽署的獨(dú)立檢測報(bào)告；

2. 一些標(biāo)準(zhǔn)可能與安全柜安全性能無直接關(guān)聯(lián)，例如生物安全柜生產(chǎn)商聲稱獲得ISO9001質(zhì)量認(rèn)證，而ISO9001并不會(huì)對(duì)安全柜性能進(jìn)行以上國際安全柜標(biāo)準(zhǔn)的檢測；

3. 認(rèn)證必須是由獨(dú)立、合法的安全柜認(rèn)證機(jī)構(gòu)測試和頒布的。

注意事項(xiàng)

操作者

生物安全柜如果使用不當(dāng)，其防護(hù)作用***可能大大受到影響。

紫外燈

生物安全柜中不需要紫外燈。如果使用紫外燈的話，應(yīng)該每周進(jìn)行清潔，以除去可能影響其殺菌效果的灰塵和污垢。

明火

在生物安全柜內(nèi)所形成的幾乎沒有微生物的環(huán)境中，應(yīng)避免使用明火。

溢出

實(shí)驗(yàn)室中要張貼如何處理溢出物的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)則，每一位使用實(shí)驗(yàn)室的成員都要閱讀并理解這些規(guī)程。

認(rèn)證

在安裝時(shí)以及每隔一定時(shí)間以后，應(yīng)由有資質(zhì)的專業(yè)人員按照生產(chǎn)商的說明對(duì)每一臺(tái)生物安全柜的運(yùn)行性能以及完整性進(jìn)行認(rèn)證，以檢查其是否符合國家及國際的性能標(biāo)準(zhǔn)。

清潔消毒

由于剩余的培養(yǎng)基可能會(huì)使微生物生長繁殖，因此在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，包括儀器設(shè)備在內(nèi)的生物安全柜里的所有物品都應(yīng)清除表面污染，并移出安全柜。

清除污染

生物安全柜在移動(dòng)以及更換過濾器之前，必須清除污染。

個(gè)體防護(hù)

在使用生物安全柜時(shí)應(yīng)穿著個(gè)體。

警報(bào)器

可以在兩種警報(bào)器中選擇一種來裝備生物安全柜。