篤瑪生物人尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA/PLAU)ELISA試劑盒實驗ELISA試劑盒原理      
用于免疫酶技術(shù)的酶有很多，如過氧化物酶，堿性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰膽堿酯酶，6－磷酸葡萄糖脫氧酶等。常用于ELISA法的酶有辣根過氧化物酶，堿性磷酸酯酶等，其中尤以辣根過氧化物酶為多。由于酶摧化的是氧化還原反應(yīng)，在呈色后須立刻測定，否則空氣中的氧化作用使顏色加深，無法準確地定量。
試劑盒組成及試劑配制 
1.         酶聯(lián)板(Assay plate )：一塊(96孔)。
2.         標準品(Standard)：2瓶(凍干品)。
3.         樣品稀釋液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4.         生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent)：1×10ml/瓶。
5.         辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent)：1×10ml/瓶。
6.         生物素標記抗體(Biotin-antibody)：1×120μl/瓶(1：100)
7.         辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin)：1×120μl/瓶(1：100)
8.         底物溶液(TMB Substrate)：1×10ml/瓶。
9.         濃洗滌液(Wash Buffer)：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10.     終止液(Stop Solution)：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

 
上海篤瑪生物科技有限公司人尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA/PLAU)ELISA試劑盒*經(jīng)營Elisa試劑盒、實驗耗材、抗體、細胞等生物化學試劑。還代理不同品牌價格檔次的ELISA試劑盒。價格實惠，質(zhì)量有保證,信譽*。敬請咨詢! 如需訂購，請點擊左上角的進行咨詢，我們會盡快跟您！
      檢測范圍：歡迎或或索取原版說明書
      zui低檢測限：歡迎或或索取原版說明書
      特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的，且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。
      有效期：6個月
      預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測定血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中的含量。
      1．試劑盒保存：-20℃(較長時間不用時)；2-8℃(頻繁使用時)。
      2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
      3．中、英文說明書可能會有不*之處，請以英文說明書為準。
      4．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。

人尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA/PLAU)ELISA試劑盒需要而未提供的試劑和器材
1.         標準規(guī)格酶標儀
2.         高速離心機
3.         電熱恒溫培養(yǎng)箱
4.         干凈的試管和Eppendof管
5.         系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器
6.    蒸餾水，容量瓶等

人尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA/PLAU)ELISA試劑盒操作步驟
實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1.         加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.         棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制)，37℃,60分鐘。
3.         溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4.         每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl，37℃，60分鐘。
5.         溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6.         依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色(30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止)。
7.         依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8.         用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。

注：
1. 用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
2. 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。
3. 為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜。
4. 未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。
5. 建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。

洗板方法
手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將*的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

注意事項
1. 當混合蛋白溶液時應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。
2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
3. 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，*使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。
5. 如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。
6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。
7. 底物請避光保存。
8. 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

計算
以標準物的濃度為橫坐標(對數(shù)坐標)，
OD值為縱坐標(普通坐標)，
在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線，
根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；
再乘以稀釋倍數(shù)；
或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，
將樣品的OD值代入方程式，
計算出樣品濃度，
再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。

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