篤瑪 雞轉移因子(TF) ELISA 試劑盒   產品介紹

樣品收集、處理及保存方法
1.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.  組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
篤瑪 雞轉移因子(TF) ELISA 試劑盒   產品介紹
Elisa試驗操作中可能影響結果的原因及其相應的解決辦法
    1 選擇試劑 選擇質量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡至少30分鐘。
    2 加樣 可能原因： 1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣； 2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時)； 3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。解決辦法： 1） 標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。 2) 加樣后及時放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自動加樣，好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標本較多時，請分批操作。
    3 孵育 可能原因： 1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 2) 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 1) 貼封片或加蓋； 2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
    4 洗板 可能原因： 1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2) 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導致洗板效果差。 3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法： 1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后好在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2) 合理安排，或多用幾臺洗板機。
    5 顯色 可能原因： 1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時保持顯色劑不外流； 3) A、B液應避免接觸金屬器械。
    6 終止 可能原因如加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板 如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸；盡可能實現ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時做好室內質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。

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ELISA 實驗步驟：
1.包被抗原：稀釋液pH 9.6 碳酸鹽緩沖液，多肽濃度2ug/ml，0.1ml/孔，4oC過夜，洗凈。
2.1%BSA (pH 9.6 碳酸鹽緩沖液) 封閉，0.1ml/孔，37oC1h，洗凈。
3.稀釋抗血清(可稀釋不同濃度) 0.1ml/孔，37oC 30分鐘，洗凈。
4.稀釋辣根過氧化物每標記的二抗0.1ml/孔，37oC 40分鐘，洗凈。
5.顯色：TMB顯色
A液：四甲基聯苯胺10mg 溶于DMF1ml中，再用pH5.0檸檬酸緩沖液稀釋100倍.
B液：5ul雙氧水加蒸餾水12.5ml 。
終止液：2N硫酸
A液、B液各一滴，比光顯色10分鐘，終止液一滴。
6.450nm 波長測OD值