C18液相色譜柱使用過程中的注意事項(xiàng)

 

C18柱 是一種常用的反相色譜柱，它以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，因此有較高的碳含量和更好的疏水性，對各種類型的生物大分子有更強(qiáng)的適應(yīng)能力，適用范圍較廣，是液相色譜儀 分析中的色譜柱類型。

　　在使用液相色譜C18儀柱過程中，須注意以下事項(xiàng)

　　1、新C18柱在使用前，須先用甲醇或乙腈試劑以20倍柱體積低流速沖洗，作用是使固定相能充分潤濕、碳鏈?zhǔn)嬲?，使色譜柱的性能達(dá)到狀態(tài)。具體操作是，將配制好65%的乙腈/水沖洗后，把色譜柱進(jìn)口端連接在色譜儀上，出口端放空（不可連上檢測器，以免污染了檢測器），以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速將色譜柱中的清稀溶液吹干，過20分鐘后再接上檢測器，以1.0ml/min的流速，繼續(xù)沖洗2~8小時(shí)；

　　2、液相色譜儀檢測分析樣品完畢后，須沖洗色譜柱。尤其是流動(dòng)相中含有酸或鹽時(shí)，需將色譜柱中的酸或鹽沖洗干凈，通常建議用10%甲醇水沖洗20倍柱體積；

　　3、若色譜柱處于長期閑置狀態(tài)時(shí)，要將色譜柱*沖洗，建議沖洗3-4小時(shí)以上，zui后保存在純有機(jī)試劑或高比例的有機(jī)試劑溶液（如90%甲醇水）中；

　　4、由于C18柱的固定相疏水性較強(qiáng)，在使用過程中盡量不要使用高水相條件，若水相比例過高易引起固定相疏水塌陷，引起柱效迅速下降，甚至造成不可逆的負(fù)面影響；由于碳載量高，表現(xiàn)尤為明顯，建議使用過程中水相比例不超過90%；

　　5、色譜柱壓力升高、柱性能下降：通常為色譜柱被污染，對色譜柱進(jìn)行再生處理可恢復(fù)部分柱效；

　　6、色譜柱壓力驟升：通常由鹽析出或篩板堵塞引起，若是鹽析出，用10%甲醇水低流速沖 洗至壓力恢復(fù)即可；若判斷并非鹽析出，以純甲醇或10%甲醇水為流動(dòng)相反沖色譜柱（將色譜柱反接，不接檢測器），若反沖半小時(shí)仍無效果則說明反沖無效，需尋找其他原因。