EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染液（23966）

EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染液（23966），是新一代的轉(zhuǎn)染試劑，帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán) 形
成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞。除了具有陽離子脂質(zhì)體（如：Lipo2000,3000）的轉(zhuǎn)染效率高，操作簡單，適用范圍廣，重復(fù)性好等特點(diǎn)外，還具有在體內(nèi)，轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低等特點(diǎn)。

EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染液（23966）

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	保存	價格(元)
EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染液（23966）	C4058L1080	1mL	4℃	200

 

細(xì)胞轉(zhuǎn)染液（核心成分為線性聚乙烯亞胺，也稱作 LPEI），是新一代的轉(zhuǎn)染試劑，帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán) 形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞。除了具有陽離子脂質(zhì)體（如：Lipo2000,3000）的轉(zhuǎn)染效率高，操作簡單，適用范圍廣，重復(fù)性好等特點(diǎn)外，還具有在體內(nèi)，轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低等特點(diǎn)。
      EZ Trans 是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔二個碳原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何 pH 下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”體。其轉(zhuǎn)染性能好于樹枝狀聚合物，而且它的細(xì)胞毒性低。
使用方法
1. 接種細(xì)胞：用膠原酶消化細(xì)胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。轉(zhuǎn)染前 18-24 小時進(jìn)行細(xì)胞的鋪板，以便在轉(zhuǎn)染時，貼壁細(xì)胞的密度  大約在 80%左右。

注：培養(yǎng)液中的血清和抗生素不影響轉(zhuǎn)染效率。
2. 準(zhǔn)備 EZ Trans-DNA 復(fù)合物
      1）轉(zhuǎn)染前將所有試劑置于室溫 10 分鐘。下面，以轉(zhuǎn)染 24 孔板培養(yǎng)皿為例，說明轉(zhuǎn)染的具體方法（如果在別的培養(yǎng)器皿中進(jìn)行轉(zhuǎn)染，各試劑建議使用量見表 1.：
      2）將 1 μg 質(zhì)粒 DNA 稀釋到 40 μL 無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基，用移液槍吹吸 3-4 次。
      3）將 3 μL EZ Trans 轉(zhuǎn)染試劑稀釋到 40 μL 無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基，用移液槍吹吸 3-4 次。
      注： 無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基是稀釋液， 不能使用含血清的培養(yǎng)基（ 包括 Opti-MEM） 進(jìn)行 DNA 和 EZ Trans 轉(zhuǎn)染試劑的稀釋！因?yàn)?EZ Trans-DNA 轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過程不能含有血清。
      4）將稀釋好的 EZ Trans 轉(zhuǎn)染試劑一次性全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒 DNA 中，立即用移液槍吹吸 3-4 次。
      注： 此混合的順序不能反向進(jìn)行！
      5）室溫放置 10-15 分鐘，以形成 EZ Trans-DNA 復(fù)合物。

 

表1：不同培養(yǎng)體積對應(yīng)的待轉(zhuǎn)DNA、EZ Trans、稀釋液用量

培養(yǎng)器皿	培養(yǎng)液體積（mL）	DNA量（μg）	EZ Trans (μL)	稀釋劑(μL)
48孔板	0.3	0.5	1.5	2 × 25
24孔板	0.5	1	3	2 × 40
12孔板	0.75	1.5	4.5	2 × 60
6孔板	1	3	9	2 × 125
35 mm培養(yǎng)皿	1	3	9	2 × 125
60 mm 培養(yǎng)皿	3	6	18	2 × 250
100 mm 培養(yǎng)皿	9	12	36	2 × 500

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞
1）將上述 80 μL EZ Trans-DNA 轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細(xì)胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動培養(yǎng)皿或輕微渦旋，讓 EZ Trans-DNA復(fù)合物分散均勻。
2）在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后 12-18 小時，去除含 EZ Trans-DNA 復(fù)合物的培養(yǎng)液。（若細(xì)胞形態(tài)欠佳，可在轉(zhuǎn)染 3-5h 后，添加 1/2 體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基，在轉(zhuǎn)染 12-18 小時后*去除含 EZ Trans-DNA 復(fù)合物的培養(yǎng)液，用含血清和抗生素的新鮮培養(yǎng)液。）
3）轉(zhuǎn)染后zui快 7h 即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)，可根據(jù)需要在 24-48 小時內(nèi)檢測轉(zhuǎn)染效率。
注： 篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株， 可在上述操作后（ 轉(zhuǎn)染細(xì)胞 24 小時后） ， 將細(xì)胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（ 將細(xì)胞稀釋 10 倍以上） ， 在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃孵育過夜。 在有轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下， 約 1～2 周可篩選到耐藥性克隆， 在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。 

運(yùn)輸與保存方法

      常溫運(yùn)輸，4℃保存，保質(zhì)期12個月。

使用注意事項(xiàng)

      質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)毒素質(zhì)粒。通過 260 nm 光吸收測定 DNA 濃度，260nm / 280nm 比值確定 DNA純度（比值應(yīng)該在 1.8～2.0 的范圍之內(nèi)）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。
      細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用 GIBCO 或者李記生物的胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞。 

特別提醒

1. 對于某些類型的細(xì)胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當(dāng)降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞的匯合度仍為 70～80%。
2. 對于接觸抑制敏感的細(xì)胞，可適當(dāng)降低鋪板密度。
3. 即使在有蛋白（如 10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI 復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞，但是 DNA-PEI 復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。
4. 對大多數(shù)細(xì)胞來而言，每 1μg DNA 使用 3.0 μL EZ Trans 試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每 1 μg DNA 使用1～4μL 體積線性 PEI 轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。 

EZ Trans轉(zhuǎn)染液用于不同細(xì)胞轉(zhuǎn)染時用量參考（以96孔板為例）

細(xì)胞型號	培養(yǎng)基	每孔細(xì)胞數(shù)	DNA的量	轉(zhuǎn)染試劑量
293H	DMEM	3×104	0.2µg	0.5µL
293FT	DMEM	3×104	0.2µg	0.5µL
293E	DMEM	3×104	0.2µg	0.5µL
293F	DMEM	3×104	0.2µg	0.5µL
COS7	DMEM	1.5×104	0.4µg	0.5µL
hela	DMEM	2×104	0.3µg	0.5µL
Caco2	MEM	3.5×104	0.3µg	0.75µL
BHK21	MEM	2×104	0.2µg	0.5µL
CHO-DG44	DMEM+HT+pro	2×104	0.5µg	0.5µL
RAW264.7	DMEM	3×104	0.2µg	0.5µL
MCF7	MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat	2×104	0.1µg	0.25µL
SW480	IMDM	3×104	0.4µg	0.5µL
MDCK	DMEM	4×104	0.6µg	1µL
CHO-K1	IMDM+Pro	3×104	0.2µg	0.5µL
HepG2	DMEM	3×104	0.5µg	0.75µL
A549	DMEM	2×104	0.3µg	0.5µL
NIH/3T3	DMEM	1.5×104	0.1µg	0.75µL
vero	DMEM	3×104	0.3µg	0.75µL
sf9	SIM SF	5×104	0.4µg	0.75µL

 

附：幾種細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法比較

幾種細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法（試劑）特點(diǎn)比較表

轉(zhuǎn)染方法	原理	主要應(yīng)用	特點(diǎn)
陽離子聚合物 （EZ Trans）	帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的 復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞。	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時轉(zhuǎn)染 所有細(xì)胞	除了具有陽離子脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率高，操作簡單，適用范圍廣，重復(fù)性好等特點(diǎn)外，還具有在體內(nèi)，轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低等特點(diǎn)，是新一代的轉(zhuǎn)染試劑。
陽離子脂質(zhì)體法	帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物，然后脂質(zhì)體上剩余的電核與細(xì)胞膜上的唾液酸殘基的負(fù)電 核結(jié)合；另一種解釋是通過細(xì)胞是內(nèi)吞作用而被進(jìn)入細(xì)胞。(若DNA濃度過高，中和脂質(zhì)體表面電核，而降低了與細(xì)胞的結(jié)合能力)	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時轉(zhuǎn)染 所有細(xì)胞	使用方法簡單，可攜帶大片段DNA，通用于各種類型的裸露DNA或RNA，能轉(zhuǎn) 染各種類型的細(xì)胞，沒有免疫原性。雖在體外基因轉(zhuǎn)染 中有很高的效率，但在體內(nèi)，能被血清清除，并在肺組織內(nèi)累積，誘發(fā)強(qiáng)烈的抗炎反應(yīng)，導(dǎo)致高水平的毒性，這在很大程度上限制了 其應(yīng)用
DEAE-葡聚糖法	帶正電的DEAE-葡聚糖與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞	瞬時轉(zhuǎn)染	相對簡便、重復(fù)比磷酸鈣好,但對細(xì)胞有一定的毒副作用,轉(zhuǎn)染時需除血清且一 般只用于BSC-1,CV-1,COS 細(xì)胞系
磷酸鈣法	磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 染瞬轉(zhuǎn)染	不適用于原代細(xì)胞（所需的DNA濃度較高）,操作簡便但重復(fù)性差,有些細(xì)胞不適用細(xì)胞建議用CSCL梯度離心，轉(zhuǎn)染是拷貝數(shù)較多
逆轉(zhuǎn)錄病毒(RNA)	通過病毒中膜糖蛋白和宿主細(xì)胞表面的受體相互作用而 進(jìn)入宿主細(xì)胞，之后反轉(zhuǎn)入酶 啟動合成DNA并隨機(jī)整合到宿主基因組中	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 特定宿主細(xì)胞	可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞，體內(nèi)細(xì)胞等,但攜 帶基因不能太大（<8kb）, 細(xì)胞需處分離期,需考慮安 全因素
腺病毒 (雙鏈 DNA)	先和細(xì)胞表面的受體結(jié)合，繼而在αv整合素介導(dǎo)下被細(xì) 胞內(nèi)吞	瞬時轉(zhuǎn)染 特定宿主細(xì)胞	可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,需考慮安全因素
Biolistic顆粒傳遞法 （基因槍粒子轟擊法）	將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細(xì)胞，DNA在胞內(nèi)逐步釋放，表達(dá)	瞬時性轉(zhuǎn)染 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染	可用于：人的表皮細(xì)胞， 纖維原細(xì)胞，淋巴細(xì)胞系以及原代細(xì)胞
顯微注射法	用顯微操作將 DNA直接注入靶細(xì)胞核	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時轉(zhuǎn)染	轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限,多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細(xì)胞
電穿孔法	高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導(dǎo)入	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時轉(zhuǎn)染 所有細(xì)胞	適用性廣，除了質(zhì)粒外，還可轉(zhuǎn)染大的基因組 （>65kb）但細(xì)胞致死率高， DNA和細(xì)胞用量大，  需根據(jù)不同細(xì)胞類型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件，拷貝數(shù)較少1-20

 

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	保存	價格(元)
	C4058L1080	1mL	4℃	200
	C4058L1082	50mL	4℃	1800
	C4058L1084	500mL	4℃	5500