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電動(dòng)移液器制備384孔板，快穩(wěn)準(zhǔn)
在高通量應(yīng)用中，384孔板的制備越來(lái)越普遍，與此同時(shí)，減少樣品制備差異和用戶(hù)錯(cuò)誤的需求也在增加。
賽多利斯Picus® Nxt 電動(dòng)移液器可簡(jiǎn)化樣品制備流程，提高速度和準(zhǔn)確度。其具有的多種功能不僅可減少移液錯(cuò)誤，還允許用戶(hù)更快生成數(shù)據(jù)。
384孔板實(shí)驗(yàn)應(yīng)選擇哪種移液器？
選擇移液器時(shí)，必須考慮每個(gè)移液器的工作量程。移液器在其標(biāo)稱(chēng)(最大)容量下可提供較精確性能。因此，雖然使用單個(gè)移液器覆蓋大容量范圍非常方便，但選擇多個(gè)移液器將確保獲得可靠的結(jié)果。表1列出了基于應(yīng)用和所需容量推薦的移液器。
表1
如何將樣品從96WP轉(zhuǎn)到384WP ？
制備384WP檢測(cè)時(shí)，通常是從96孔板(96WP)格式的樣品或標(biāo)準(zhǔn)來(lái)轉(zhuǎn)移。多通道移液器可輕松將96WP轉(zhuǎn)到384WP。與手動(dòng)移液相比，使用電動(dòng)移液器有助于加快孔板的樣品轉(zhuǎn)移進(jìn)程(表2)。另一個(gè)好處是，電動(dòng)移液器的孔板向?qū)Чδ苡兄谟脩?hù)在每次吸液和排液步驟中始終了然加樣的孔位。
表2
如何在384WP 移液中使用孔板向?qū)Чδ埽?nbsp;
處理少量樣品時(shí)，保持正確的孔與移液間的順序是一項(xiàng)挑戰(zhàn)。電動(dòng)移液器可以使用孔板向?qū)Чδ芊乐勾祟?lèi)錯(cuò)誤。例如，將Picus® 移液器的孔板向?qū)Чδ茉O(shè)置為按列或按行移液，并報(bào)告下一行接收液體的孔。
多通道移液器上的孔板向?qū)Чδ芸娠@著提高用戶(hù)對(duì)384WP 制備的信心和速度。
如何在384WP中進(jìn)行細(xì)胞接種和補(bǔ)液？
為了在384WP的每個(gè)孔中獲得準(zhǔn)確細(xì)胞數(shù)，須以適當(dāng)方式制備細(xì)胞懸液或稀釋液。這只需通過(guò)根據(jù)良好移液操作對(duì)電動(dòng)移液器進(jìn)行編程即可(表3)。
表3
不良移液操作(快速排液、產(chǎn)生氣泡)以及在細(xì)胞接種后立即將孔板放入培養(yǎng)箱，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞在孔中分布不均勻(圖1A)。與良好移液操作相比，這可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)量在細(xì)胞接種后24小時(shí)內(nèi)減少70%。良好移液操作可實(shí)現(xiàn)均勻細(xì)胞分布和良好細(xì)胞活力(圖1B)。
圖1. B16F10 小鼠黑色素瘤細(xì)胞以(A)不良和(B)良好移液操作在384 孔板中接種。
可通過(guò)調(diào)節(jié)電動(dòng)移液器的吸液和排液速度，以溫和方式進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)補(bǔ)液(培養(yǎng)基更換)，盡量降低分離粘附細(xì)胞的風(fēng)險(xiǎn)。移液速度過(guò)快或正向移液會(huì)產(chǎn)生氣泡并對(duì)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生負(fù)面影響(圖2A)。該問(wèn)題可通過(guò)反向移液或使用多次分液模式輕松避免，該模式無(wú)需最后一次吹空即可輸送目標(biāo)體積(圖2B)。
圖2. 在384 孔板中接種細(xì)胞或向其分配細(xì)胞培養(yǎng)基時(shí)，移液模式很重要。
A)如果通過(guò)正向移液添加培養(yǎng)基，則會(huì)形成氣泡。細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM + 10% FBS.
B)將培養(yǎng)基移至384 孔板的孔中，反向移液或多次分液不會(huì)形成氣泡。
多次分液模式顯著加快了384WP中細(xì)胞接種或培養(yǎng)基更換的速度(表4)。
表4
賽多利斯 iQue® Screener 的實(shí)驗(yàn)制備應(yīng)使用哪種Picus® Nxt 移液器？
iQue® 試劑盒說(shuō)明書(shū)包含了每個(gè)工作流程步驟的詳細(xì)描述，這些方案使用了Picus® 移液器開(kāi)發(fā)。圖3和表5列出了我們?yōu)樵?84WP 中制備iQue® 人T細(xì)胞活化及細(xì)胞因子分析(TCA)試劑盒的每個(gè)步驟推薦的移液器和設(shè)置。
圖3
表5
總結(jié)
電動(dòng)移液器在涉及384WP的細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用中具有許多優(yōu)勢(shì)。電動(dòng)移液器的移液模式和速度等移液操作標(biāo)準(zhǔn)化有助于改善細(xì)胞健康，減少用戶(hù)間的差異，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更具可重復(fù)性?？装逑?qū)Чδ苡绕溆兄诒苊庥脩?hù)在長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)移液的工作流程中出錯(cuò)。重要的是，電動(dòng)移液器具有符合人體工程學(xué)的優(yōu)點(diǎn)，有助于防止用戶(hù)疲勞，從而進(jìn)一步增強(qiáng)對(duì)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確度的信心。