一、實驗目的

本研究針對豬肉中多種獸藥殘留同時檢測的目的，開發(fā)了經過優(yōu)化的固相萃取前處理方法和HPLC分析方法。待測物質為主要的抗生素獸藥種類中具有代表性的化合物，包括磺胺類、四環(huán)素類、喹諾酮類、類。

二、實驗目標物

麻保沙星  (CAS:115550-35-1)，雙氟沙星（CAS:98106-17-3），（CAS:79-57-2），（CAS:73231-34-2），（CAS:2447-57-6），（CAS:155-91-9），（CAS:56-75-7）。

三、應用范圍

本方法適用于豬肉中多種獸藥殘留的檢測的HPLC檢測及確證。

四、實驗材料

biocomma®Copure® HLB 固相萃取柱60mg/3mL(Cat. No. COHLB360)。

五、實驗步驟

1、樣品提取

準確稱取豬肉3 g于50 mL離心管中，加入0.1 mol/L的EDTA-Mcllvaine溶液15 mL，漩渦搖勻1 min，冰水浴超聲10 min，控制樣品溫度<15 ℃；5000 r/min離心8 min。取上清液，重復提取一次，合并清液、快速濾紙過濾，備用。

2、SPE柱凈化

(1)活化：HLB固相萃取柱使用前用3 mL甲醇、3 mL水活化 。
(2)上樣和洗脫：在HLB固相萃取柱上加入10 mL備用樣液，棄去流出液，用3 mL 5%甲醇水溶液（v/v）淋洗，棄去淋洗液，抽干小柱；用8 mL甲醇-乙酸乙酯溶液（1:9，v/v）洗脫，收集洗脫液（整個上樣、洗脫過程保持流速2 mL/min） 。
(3)重新溶解：洗脫液40 ℃氮吹吹干，1 mL甲醇定容，過0.45 μm 濾膜，上機測試。

3、HPLC條件

設  備：Waters Alliance 2695
色譜柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm, 5 μm )
檢測器 ：Waters 2487 紫外檢測器
流動相 ：A：乙腈  B： 0.1%甲酸水溶液（v/v）
洗脫方式：梯度洗脫
表1  梯度洗脫條件

流速：1.0 mL/min
檢測波長：270 nm
進樣體積:  20 μL

六、實驗結果

1、4 mg/kg豬肉中多種獸藥的添加回收結果
表2 4 mg/kg豬肉中多種獸藥的添加回收結果

2、添加水平為4 mg/kg豬肉中多種獸藥檢測的液相色譜圖

圖1 添加水平為4 mg/kg豬肉中多種獸藥檢測的液相色譜圖