愈風(fēng)寧心片為葛根藥材乙醇提取物與葛根細(xì)粉經(jīng)混合制粒、壓片而成，《中國藥典》2000年版一部以葛根素作為指標(biāo)成份控制；本品具有解頸止痛、增加腦及冠狀動(dòng)脈血流量的作用。用于高血壓頭暈，
頭痛，頸項(xiàng)疼痛，冠心病，心絞痛，神經(jīng)性頭痛，早期突發(fā)性耳聾等病癥[1]。其主要有效成份為葛根素，據(jù)報(bào)道其口服給藥在動(dòng)物體內(nèi)生物利用度較低，有關(guān)人體內(nèi)生物利用度的研究尚未見報(bào)道[2，3]。鑒
于固體口服制劑的生物利用度與藥物溶出度密切相關(guān)，我們研究了葛根細(xì)粉的粉碎工藝技術(shù)與愈風(fēng)寧心片溶出度的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。
1、儀器與試藥
BJ-2型崩解儀（天津市國銘醫(yī)藥設(shè)備公司）；RCZ-8A型智能藥物溶出儀（天津大學(xué)精密儀器廠）；LC-10A 液相色譜儀（LC-10AD 泵，SPD-10AUV 檢測器，C-R7A 數(shù)據(jù)處理機(jī)），Shim-Pack-ODS（6.0×150mm）柱；JL9200 激光粒度儀（濟(jì)南微納儀器有限公司）；葛根素對照品（中國藥品生物制品檢定所）；葛根藥材（購于陜西鎮(zhèn)平縣醫(yī)藥公司），經(jīng)鑒定為豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd.）Ohwi的干燥根；SF-60 型普通粉碎機(jī)（常熟中藥制藥機(jī)械廠）；試驗(yàn)型微粉機(jī)甲醇、乙醇為分析純。
2、實(shí)驗(yàn)方法
2.1樣品制備
2.1.1葛根浸膏提取
取葛根粗粉850g，用85% 乙醇加熱回流提取三次，*次加8倍量提取4小時(shí)，第二、三次各加6倍量提取3小時(shí)，放出濾過，合并濾液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.32（70℃）放出即得。
2.1.2葛根細(xì)粉的制備及粒度分布檢查
細(xì)粉A：用普通粉碎機(jī)（羅底100目）將葛根片粉碎后再過200目細(xì)篩即得。
細(xì)粉B：每次取葛根片400g投進(jìn)微粉機(jī)粉碎13分鐘（此時(shí)間經(jīng)實(shí)驗(yàn)以100%過200目篩確定）放出即得。
粒度分布檢查：利用激光粒度儀對細(xì)粉A、細(xì)粉B的粒度（0.6～90µm）分布情況進(jìn)行了檢測。
2.1.3片劑制備（素片）
片A：取葛根（850g）提取浸膏與細(xì)粉A 150g混合干燥，粉碎后過100目篩加適量淀粉、羧甲基纖維素混勻，用70% 乙醇潤濕制粒、干燥整粒，加0.5%硬脂酸鎂混勻后壓片1000片（片重220mg）。
片B：取葛根（850g）提取浸膏與細(xì)粉B 150g 混合干燥，粉碎后過100目篩加適量淀粉、羧甲基纖維素混勻，用70% 乙醇潤濕制粒、干燥整粒，加0.5%硬脂酸鎂混勻后壓片1000片（片重220mg）。
2.2溶出度研究
2.2.1色譜條件
用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：甲醇-水（25∶75）；流速1ml•min-1；柱溫為室溫；檢測波長為250nm。
2.2.2崩解度測定
按《中國藥典》2000年版一部片劑通則項(xiàng)下崩解時(shí)限的檢驗(yàn)方法，取三批片A樣測得的崩解時(shí)限分別為42±3min，44±2min，45±2min；取三批片B樣測得的崩解時(shí)限分別為43±3min，45±2min，
45±7min；均符合其規(guī)定。
2.2.3線性范圍
精密稱取葛根素對照品10mg，置25ml量瓶中，加30%乙醇稀釋至刻度，搖勻；分別精密量取0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml，置10ml 量瓶中，用30%乙醇稀釋至刻度，在上述色譜條件下測定葛根素
色譜峰面積。以濃度C為橫坐標(biāo),峰面積A為縱坐標(biāo)，按zui小二乘法進(jìn)行線性回歸, 得回歸方程C=7.92×10-2A – 1.86×10-1,r=0.9992，葛根素含量在20～200µg•ml-1線性關(guān)系良好。
2.2.4樣品中葛根素含量測定
取愈風(fēng)寧心片10片（素片），精密稱定，研細(xì)，取細(xì)粉約50mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇50ml，閉塞稱定重量，超聲處理20min，稱定重量，用30%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖
勻，濾過，取續(xù)濾液作供試品溶液；取供試品溶液10µl，進(jìn)樣測定，得片A的含量為13.62mg/片（n=3），片B的含量為17.43mg/片（n=3）。
2.2.5溶出度測定
按照《中國藥典》2000年版二部溶出度測定方法中的*法測定，以水為釋放介質(zhì)，每只轉(zhuǎn)籃中放置3片，測得的溶出量為平均溶出量；轉(zhuǎn)速為100r.min-1，平行對片A、片B各測6組。
3、結(jié)果
3.1細(xì)粉A、細(xì)粉B的粒度分布測試結(jié)果
                             表1  細(xì)粉A的粒度分布情況
   序號   粒度（um）  體積%    累積%    序號   粒度（um）   體積%    累積%                          
                            
1     0.6-1.2      0.000      0.00      15     27-30        2.302      14.59
2     1.2-3.0      0.000      0.00      16     30-34        2.532      17.12
3     3.0-4.5      0.006      0.01      17     34-38        3.276      20.40
4     4.5-6.2      0.372      0.38      18     38-42        3.757      24.16
5     6.2-7.6      0.534      0.91      19     42-46        4.102      28.26
6     7.6-9.2      0.802      1.71      20     46-50        4.306      32.57
7     9.2-11.4     0.871      2.58      21     50-54        4.402      36.97
8     11.4-12.8    1.089      3.67      22     54-58        4.688      41.66
9     12.8-14.2    1.102      4.77      23     58-62        10.372     52.03
10    14.2-15.8    1.123      5.89      24     62-66        14.249     66.28
11    15.8-17      1.151      7.04      25     66-70        17.901     84.18
12    17-20        1.301      8.34      26     70-75        15.618     99.80
13    20-24        1.682      10.02     27     75-80        0.201      100.00
14    24-27        2.266      12.29     28     80-90        0.000      100.00
        
表2  細(xì)粉B的粒度分布情況
  序號   粒度（um）  體積%    累積%      序號     粒度（um）  體積%    累積%                        
                              
1     0.6-0.9      0.000     0.00         15       14-17        5.167     32.32
2     0.9-1.3      1.824     1.82         16       17-20        6.079     38.40
3     1.3-2.0      3.445     5.27         17       20-24        6.890     45.29
4     2.0-2.5      1.216     6.48         18       24-28        7.599     52.89
5     2.5-3.2      0.810     7.29         19       28-32        7.801     60.69
6     3.2-4.0      1.014     8.31         20       32-36        7.497     68.19
7     4.0-5.2      1.419     9.73         21       36-40        7.36      75.58
8     5.2-6.0      0.912     10.64        22       40-45        7.194     82.78
9     6.0-6.8      1.216     11.85        23       45-52        6.687     89.46
10    6.8-7.7      1.722     13.58        24       52-60        5.268     94.73
11    7.7-8.7      2.330     15.91        25       60-70        3.445     98.18
12    8.7-9.9      3.040     18.95        26       70-75        1.732     99.91
13    9.9-12       3.749     22.70        27       75-80        0.089     100.00
14    12-14        4.458     27.15        28       80-90        0.000     100.00 
                                            
注：200目篩孔內(nèi)徑為75μm，300目篩孔內(nèi)徑為47μm，5μm相當(dāng)于2000目。

3.2溶出度測定結(jié)果
                          表3  愈風(fēng)寧心片累積溶出率（%）
       時(shí)間/min      A          B       時(shí)間/min      A            B
        10        3.2±1.6    6.5±7.2    40       42.9±1.5   71.3±1.4
        15        7.8±8.1   16.2±1.4    45       56.2±2.3    82.4±1.8
        20       11.5±5.3   26.7±2.1    50       62.1±5.6    91.6±4.1
        25       17.8±4.3   34.2±1.7    55       66.8±7.5    93.2±5.8
        30       24.6±6.1   45.6±8.2    60       69.6±6.4    96.8±5.2
        35       31.4±2.6   56.4±5.2          
注：n=6

3.3片A、片B溶出度比較
          表4  愈風(fēng)寧心片溶出度比較
                樣 品                  T50/min             P
                 A                    43.2±6.1          <0.01
                 B                    32.5±3.5
 
3.4同種粉碎工藝技術(shù)制備不同批次制劑的溶出度穩(wěn)定性比較
表5 愈風(fēng)寧心片不同批次間溶出度比較
               樣  品    批   號            T50/min            P
                         010426            43.5±5.6
                 A       010427            48.6±2.6         <0.05
                         010428            58.5±6.2
                         010424            32.8±1.7
                 B       010422            33.2±3.4         >0.05
                         010421            33.0±1.2
 
4、討論
4.1植物細(xì)胞中的有效成份需經(jīng)過浸潤、溶脹、滲透和擴(kuò)散方能溶出，超微粉碎技術(shù)一方面可使生藥細(xì)粉的表面積大大增加，提高藥物的溶出速度，從而有利于藥物的吸收[4]；另一方面超微粉碎技術(shù)
可使植物藥細(xì)胞破壁率達(dá)90%，從而使植物細(xì)胞中的有效成份直接暴露出來并進(jìn)入體液，提高其生物利用度[5]，這是本實(shí)驗(yàn)中超微粉碎技術(shù)制得的制劑溶出度遠(yuǎn)大于普通粉碎技術(shù)制得的制劑的原因所在。
有關(guān)本實(shí)驗(yàn)制劑的生物利用度有待進(jìn)一步研究。
4.2固體制劑的溶出度與原輔料的物化性質(zhì)、制劑工藝等因素密切相關(guān)，不同廠家因采用不同的原輔料和生產(chǎn)方法，必然造成溶出度有較大差異，建議應(yīng)通過研究對愈風(fēng)寧心片溶出度作出統(tǒng)一的評價(jià)
標(biāo)準(zhǔn)及控制標(biāo)準(zhǔn)，以此保證其臨床療效。
4.3采用普通粉碎技術(shù)獲得的愈風(fēng)寧心片不同批次間溶出度存在較大差異，原因可能與其獲得的藥粉不能全部位過篩有關(guān)，葛根纖維性較強(qiáng)，利用普通粉碎機(jī)不能加工至全部位達(dá)到微米中藥（1～75µm）
的細(xì)度，不僅每次粉碎所得的細(xì)粉在粒度上差異大，而且在所含組織或部位上亦有差異，進(jìn)而所含有效成份也就不同；超微粉碎經(jīng)過試驗(yàn)確定出全過篩（200目）粉碎時(shí)間是以藥材全部入
藥為前提的，所以各批次之間差異很小，由此看來，利用超微粉碎技術(shù)獲得的生藥粉制劑，更符合中醫(yī)處方用藥的要求。
4.4轉(zhuǎn)籃法測定溶出度通常為每籃放1片，考慮到本實(shí)驗(yàn)含量測定方法的線性范圍及片劑的葛根素含量，改為每籃放3片。