黃熱病毒IgM抗體ELISA試劑盒 96T
儲(chǔ)存和使用期:2-8°C (本司還有登革,瘧疾,錐蟲(chóng),恙蟲(chóng),黑熱病,西尼羅河,乙腦,基孔肯雅熱,鉤端螺旋體,立氏克體,等科研診斷試劑)
應(yīng)用:用于定性檢測(cè)人血清,血漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液或任何生物液體中的YFV-IgM。
介紹
黃熱病,歷*稱(chēng)為黃色杰克,黃色瘟疫或青銅約翰,是一種急性病毒性疾病。在大多數(shù)情況下,癥狀包括發(fā)熱,寒戰(zhàn),食欲不振,e心,特別是在背部的肌肉痛,和頭痛。癥狀通常在五天內(nèi)改善。在一些人在一天內(nèi)改善,發(fā)燒回來(lái),腹痛發(fā)生,肝損傷開(kāi)始導(dǎo)致黃色皮膚。如果發(fā)生這種情況,出血和腎臟問(wèn)題的風(fēng)險(xiǎn)也增加。
測(cè)定原理
96孔板YFV-IgM特異性抗原。將對(duì)照或測(cè)試樣品加入到合適的孔中并孵育。用洗滌緩沖液洗去游離組分。將HRP綴合的檢測(cè)試劑加入到孔中。 TMB底物用于顯現(xiàn)HRP酶反應(yīng)。 TMB由HRP催化以產(chǎn)生在加入酸性停止溶液后變?yōu)辄S色的藍(lán)色產(chǎn)物。黃色的密度與板中捕獲的樣品的YFV-IgM量成比例。外徑在微板讀數(shù)器中在450nm下通過(guò)分光亮度計(jì)測(cè)量吸亮度,然后可以計(jì)算YFV-IgM的濃度。
套件組件
- 一個(gè)96孔板預(yù)涂
- 陽(yáng)性對(duì)照:0.5ml
- 陰性對(duì)照:0.5ml
- 洗滌緩沖液(30×):20 ml。稀釋?zhuān)?/span>1:30
- 樣品稀釋緩沖液:6ml
- 6HRP酶聯(lián)試劑(RTU):6ml
- 終止液:6ml
- TMB底物:6ml
- TMB底物B:6ml
- 板密封:2
- 密封袋:1
需要材料但不提供
1.37℃培養(yǎng)箱
2.酶標(biāo)儀(波長(zhǎng):450nm)
3.精確的移液器和一次性移液器吸頭
4.自動(dòng)洗板機(jī)
5.ELISA振蕩器
1.5ml管
7.板蓋
8.吸收濾紙
9.100ml和1L體積量筒。
使用程序:
A.制備樣品和試劑
1. 樣品
收集并立即分析測(cè)試樣品(2小時(shí)內(nèi))后立即分離。或等分并長(zhǎng)期儲(chǔ)存在-20°C。避免多個(gè)凍融循環(huán)。
?細(xì)胞培養(yǎng)上清:以約2000-3000×rpm離心20分鐘,以去除沉淀,立即分析或分裝,并儲(chǔ)存于-20℃。
?血清:在室溫下凝結(jié)血清(約4小時(shí))。以約2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析血清或等分,并儲(chǔ)存在-20°C。
?血漿:用檸檬酸鹽或EDTA作為抗凝劑收集血漿。在收集30分鐘內(nèi)以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分,并存儲(chǔ)在-20°C冷凍。
尿:在無(wú)菌容器中收集,以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分,并存儲(chǔ)在-20°C冷凍。
組織:組織勻漿的制備將根據(jù)組織類(lèi)型而變化。收集和沖洗樣品在2-4℃下用PBS(Ph 7.4)。稱(chēng)重樣品并用PBS(Ph 7.4)勻化,并對(duì)細(xì)胞懸浮液進(jìn)行超聲處理。以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即測(cè)定或等分并儲(chǔ)存在-80℃。
注意:
1.*凝結(jié)血液樣品,離心,避免溶血和沈淀。
2.NaN3不能用作試驗(yàn)樣品防腐劑,因?yàn)樗种?/span>HRP。
2.洗滌緩沖液
用蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液30倍(1/30)(即將20ml濃縮洗滌緩沖液加入580ml蒸餾水中)。
B.測(cè)定程序
在使用前將試劑盒組分和樣品平衡至室溫。建議繪制每個(gè)測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
1.在預(yù)涂板上分別設(shè)置陽(yáng)性/陰性,測(cè)試樣品和對(duì)照(零)孔,并記錄它們的位置。
2.將50μl的陰性和陽(yáng)性對(duì)照等分到設(shè)定的孔中。
3.向?qū)φ眨悖┛字屑尤?/span>50μl樣品稀釋緩沖液。
4.向測(cè)試樣品孔中加入50μl適當(dāng)稀釋的樣品。在底部加入溶液而不接觸側(cè)壁。搖動(dòng)平板以混合內(nèi)容物。
5.用蓋子密封板,并在37℃孵育30分鐘。
6.取下蓋子并通過(guò)在吸收性濾紙或其他吸收材料上敲擊板來(lái)丟棄板內(nèi)容物。
7.棄去溶液,用洗滌緩沖液洗滌板5次。不要讓孔在任何時(shí)候*干燥。
手動(dòng)清洗:丟棄溶液,不要接觸側(cè)壁。將吸水濾紙或其他吸收材料上拍出液體。將洗滌緩沖液填滿每個(gè)孔,并在ELISA振蕩器上輕輕渦流2 分鐘。丟棄內(nèi)容物,并將吸收性濾紙或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自動(dòng)洗滌:棄去所有孔中的溶液,并用洗滌緩沖液洗滌板5次(用緩沖液過(guò)量填滿孔)。在zui后的洗滌之后,翻轉(zhuǎn)該板并敲擊吸收性濾紙或其它吸收材料。建議將清洗器設(shè)置為1分鐘的浸泡時(shí)間。
8.向每個(gè)孔中加入50μlHRP結(jié)合物的試劑(對(duì)照孔除外)。在每個(gè)孔底部加入溶液,不要接觸側(cè)壁。
9.用蓋子密封板,并在37℃孵育30分鐘。
10.取下蓋子,用洗滌緩沖液洗板5次。
11.向每個(gè)孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B,蓋上平板并在37℃下孵育15分鐘。避免暴露于光。
12.向每個(gè)孔中加入50μl終止液,充分混勻。顏色應(yīng)立即變?yōu)辄S色。
13.閱讀O.D.在微板讀數(shù)器中在450nm的吸亮度在加入終止溶液的15分鐘內(nèi)。對(duì)于計(jì)算,(相對(duì)O.D.450)=(每個(gè)孔的O.D.450) - (零阱的O.D.450)。標(biāo)準(zhǔn)曲線可以作為每種標(biāo)準(zhǔn)溶液(Y)的相對(duì)O.D.450與標(biāo)準(zhǔn)溶液(X)的相應(yīng)濃度作圖。可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線插入樣品的人類(lèi)YFV-IgM濃度。
14.注意:如果稀釋樣品,稀釋倍數(shù)乘以內(nèi)插法得到稀釋前的濃度。
C.結(jié)果確定
1.試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照的平均值≥1.00; 陰性對(duì)照的平均值≤0.10。
2.臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=負(fù)控制的平均值+0.15
3.陰性結(jié)果:如果OD值<CUT OFF,樣品為人YFV-IgM陰性。
4.陽(yáng)性結(jié)果:如果OD值≥CUTOFF,樣品為人類(lèi)YFV-IgM陽(yáng)性。
D.注意事項(xiàng)
1.在實(shí)驗(yàn)之前,離心每個(gè)試劑盒組分?jǐn)?shù)分鐘,將所有試劑倒入試管底部。
2.在混合或重新組裝部件時(shí)避免起泡或氣泡。
3.洗滌緩沖液可結(jié)晶并分離。如果發(fā)生這種情況,請(qǐng)加熱管以溶解。
4.建議每個(gè)對(duì)照和樣品一式兩份或重復(fù)測(cè)量三次。
5.不要讓板在任何時(shí)候*干燥!這可以使板上的生物材料失活。
6.不要重復(fù)使用移液器吸頭和管,以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中過(guò)期的組件或組件。
8.將TMB底物B儲(chǔ)存在黑暗中,并且為了避免板溫育對(duì)于溫度差的邊緣效應(yīng),建議在使用前在室溫下使TMB底物平衡30分鐘。用滅菌的吸頭抽吸所需的劑量,不要將殘留溶液倒回到小瓶中。
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