篤瑪 長春質(zhì)堿 產(chǎn)品介紹
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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標本要求
1. 血清:
室溫血液自然凝固10-20 分鐘后,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。保
存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
2. 血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20 分鐘后,離心20
分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成應再次離心。
3.尿液:
用無菌管收集。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀
形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4.細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。
5.培養(yǎng)細胞:
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100 萬/ml 左右。
通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20 分鐘左
右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
6.組織標本:
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融?br />后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻
漿器將標本勻漿化。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢
測,其余冷凍備用。
7.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進
行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
8.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
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注意事項
1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。
2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。
3. 一次加樣時間好控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,*使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,好做復孔。
5. 如標本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。
6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。
7. 底物請避光保存。
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