【概要】
赭曲霉毒素A (Ochratoxin A)是曲霉屬和青霉屬的真菌形成的次級代謝產(chǎn)物，屬烈性的shen臟毒和gan臟毒，廣泛存在于各種食物中，谷物及其副產(chǎn)品是赭曲霉毒素A的主要來源。動物實驗表明攝入了被這種毒素污染的飼料后，會發(fā)生急性或慢性中毒癥。防止污染赭曲霉毒素A的食品和飼料直接或間接地進入人類食物鏈，加強對赭曲霉毒素A的檢測十分重要。
【適用范圍及性能】
用于定性、定量檢測谷物、酒類、中藥等食品和飼料等樣本中的赭曲霉毒素A時的樣品前處理。
柱容量：≥200ng
回收率：≥90%
【試驗原理】
本產(chǎn)品的測定的基礎是抗原抗體反應，赭曲霉毒素A單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠上，樣品中的赭曲霉毒素A經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢的通過赭曲霉毒素A免疫親和層析柱，在免疫親和柱內(nèi)，赭曲霉毒素A與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他物質(zhì)。用甲醇洗脫赭曲霉毒素A，然后注入到分析儀器中用于檢測。
【包裝組成】
根據(jù)不同規(guī)格，每一個盒中包含5/25支赭曲霉毒素A免疫親和層析柱及1份說明書。
【需要而未提供的設備及試劑】
設備：
1. 高速均質(zhì)器或組織勻漿機
2. 粉碎機
3. 200mL/50mL量筒
4. 天平：感量0.1g
5. 微量移液器：單道 100mL～1000mL
6. 槽紋濾紙(折疊快速定性或定量濾紙)
7. 玻璃微纖維濾紙(1.5mm孔徑)
8. 50mL漏斗
9. 一次性玻璃試管
10. 泵流操作架(包括空氣泵，不同容積的玻璃注射器等)
試劑：
1. 甲醇(色譜級)
2. 乙酸(分析純，色譜級)
3. 蒸餾水或去離子水
4. pH7.0磷酸鹽緩沖溶液(PBS緩沖液)：稱取8.0g氯化鈉，1.2g磷酸氫二鈉，0.2g磷酸二氫鉀，0.2g氯hua鉀，用990mL純水溶解，然后用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.0，后用純水稀釋至1000mL
5. 樣品提取液：配制甲醇-水(8：2)溶液作為樣品提取液
洗脫液：配制甲醇-乙酸(99：1)溶液作為洗脫液
【試劑配制】
樣品提取液：配制甲醇-水(8：2)溶液作為樣品提取液
洗脫液：配制甲醇-乙酸(99：1)溶液作為洗脫液
【樣本處理步驟】
(一)花生，玉米，大米，小麥及其制品和飼料(稀釋倍數(shù)2.5)
1. 稱取20g粉碎的樣品于100mL容量瓶中，加入5.0g氯化鈉，以甲醇-水(8：2)溶液定容至100mL;
2. 轉(zhuǎn)移到均質(zhì)杯中，以均質(zhì)器高速攪拌，提取2min;
3. 4000r/min離心5min或用定量濾紙過濾;
4. 取10mL濾液并加入40mLPBS緩沖液稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾，取過濾后液體待測;
5. 將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器;
6. 將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/S流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體;
7. 以10.0mL清洗緩沖液淋洗柱子1次，流速為1-2滴/S，棄去全部流出液;
8. 再以10.0mL水淋洗柱子1次，流速為1-2滴/S，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體;
9. 準確加入1.0mL洗脫液洗脫，流速為1 滴/S，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。
(二)啤酒，黃酒等酒類(稀釋倍數(shù)1)
1. 取10mL試樣脫氣后與90mLPBS緩沖液混勻，用玻璃微纖維濾紙過濾，取過濾后液體待測;
2. 將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器;
3. 將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/S流速緩慢通過免疫親和柱，直至2mL~3mL空氣通過柱體;
4. 以10.0mL清洗緩沖液淋洗柱子1次，流速為1-2滴/S，棄去全部流出液;
5. 再以10.0mL水淋洗柱子1次，流速為1-2滴/S，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體;
6. 準確加入1.0mL洗脫液洗脫，流速為1 滴/S，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。
【結(jié)果判定】
經(jīng)免疫親和柱凈化后，收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計或者HPLC檢測，也可使用薄層色譜或者酶聯(lián)免疫試劑盒進行檢測。
【注意事項】
1. 赭曲霉毒素危害*，應戴手套操作;
2. 不要使用過了有效日期的免疫親和柱。
3. 洗脫液可以直接使用色譜級甲醇洗脫，但會降低回收率。
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件：親和柱可于常溫保存，2-8℃儲存可延長有效期，不可凍存;
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個月。
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