方法名稱: 灰黃霉素原料藥-灰黃霉素-高效液相色譜法
應(yīng)用范圍: 本方法采用高效液相色譜法測定灰黃霉素原料藥中灰黃霉素的含量。
本方法適用于灰黃霉素原料藥。
方法原理: 供試品加流動相溶解并稀釋,進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離,用紫外吸收檢測器,于波長254nm處檢測灰黃霉素的峰面積,計算出其含量。
試劑: 1. 乙腈
2. 甲醇
3. 0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液
4. 磷酸
儀器設(shè)備: 1. 儀器
1.1 高效液相色譜儀
1.2 色譜柱
十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,理論塔板數(shù)按灰黃霉素峰計算應(yīng)不低于800。
1.3 紫外吸收檢測器
2. 色譜條件
2.1 流動相:0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液 乙腈 甲醇=57 38 5,用磷酸調(diào)節(jié)pH值為3.7±0.2
2.2 檢測波長:254nm
2.3 柱溫:室溫
試樣制備: 1. 對照品溶液的制備
精密稱取灰黃霉素對照品約50mg,置50mL量瓶中,加流動相溶解并稀釋至刻度,精密量取5mL,置50mL量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,即為對照品溶液。
2. 供試品溶液的制備
取供試品10片,精密稱定,研細(xì),精密稱取適量(約相當(dāng)于灰黃霉素100mg),置100mL量瓶中,加流動相適量,超聲處理30分鐘,放冷至室溫,加流動相稀釋至刻度,搖勻,用0.45µm微孔濾膜濾過,精密量取續(xù)濾液5mL,置50mL量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,即為供試品溶液。
注:“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。
操作步驟: 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10mL,注入高效液相色譜儀,用紫外吸收檢測器于波長254nm處測定灰黃霉素(C17H17ClO6)的峰面積,計算出其含量。
參考文獻(xiàn): 中華人民共和國藥典,國家藥典委員會編,化學(xué)工業(yè)出版社,2005版,二部,p.192