英文名稱:D-β-homoleucine.HCl
CAS號:1276055-44-7
別名:(R)-3-Amino-5-methylhexanoic acid hydrochloride
D-beta-homoleucine-HCl
(3R)-3-amino-5-methylhexanoic acid,hydrochloride
分子式:C7H15NO2.HCl
分子量:181.66044
結(jié)構(gòu)圖:
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Kuai 等[33]開發(fā)了一種以合成高密度脂蛋白納米材料為抗原肽( 如SIINFEKL、小鼠結(jié)腸腺癌MC-38 細胞的Adpgk 基因突變肽) 和佐劑載體的個體化肽疫苗。疫苗與BMDCs 或JAWSII 細胞共同孵育,流式細胞術(shù)-抗原肽-HLA+法或細胞溶酶體和細胞核染色的共聚焦顯微鏡法分析DCs 對抗原肽的遞呈。FITC 標記的抗原肽尾基部皮下注射雌性C57BL /6 小鼠,交互式視頻信息系統(tǒng)( interactivevideo information system, IVIS) 分析小鼠腹股溝淋巴結(jié)對抗原肽的遞呈??乖诤闲訠MDCs 與抗原特異性B3Z CD+8 T 細胞雜交瘤共同孵育,以氯酚紅-β-D-半乳糖苷的吸光度為指標,評價T 細胞的活化。疫苗免疫雌性C57BL /6 小鼠,流式細胞術(shù)-抗原肽-HLA 四聚物+ CD+8α T 細胞法分析免疫后小鼠外周血中抗原特異性T 細胞; 同時將免疫后小鼠脾細胞與抗原肽共同孵育,ELISPOT-IFN-γ 法分析抗原肽的細胞免疫原性。疫苗免疫后小鼠脾細胞為效應細胞,MC-38 腫瘤細胞為靶細胞,采用乳酸脫氫酶法( lactic dehydrogenase,LDH) 評價CTL 的細胞毒性。疫苗免疫后雌性C57BL /6 小鼠皮下或靜脈注射接種腫瘤細胞( B16OVA) ,建立免疫預防性抗腫瘤生長或轉(zhuǎn)移模型; 或小鼠皮下注射接種腫瘤細胞( MC-38 或B16F10) ,再用疫苗免疫小鼠,建立免疫治療性抗腫瘤生長模型; 以腫瘤體積和腫瘤肺轉(zhuǎn)移數(shù)為指標,評價疫苗的抗腫瘤作用; 流式細胞術(shù)-IFN-γ +TNF-α + CD +8α CD +4 T 細胞法檢測免疫后小鼠外周血與抗原肽孵育后產(chǎn)生的T 細胞反應和TIL。結(jié)果顯示DCs 可有效遞呈疫苗抗原肽,該疫苗可有效誘導產(chǎn)生T 細胞反應,其誘導產(chǎn)生的新抗原特異性CTL數(shù)量為單獨可溶性抗原肽疫苗的47 倍; 該疫苗結(jié)合抗PD-1 和抗CTLA-4 可有效抑制體內(nèi)MC-38 和B16F10 腫瘤生長。
Kinkead 等[34]通過全外顯子組測序、RNA 測序和MHC-肽預測性結(jié)合算法( 如NetMHC) 分析鼠Panc02 細胞系的新抗原,將其制備成肽疫苗( PancVAX)。疫苗后下肢注射免疫雄性C57BL /6 小鼠,分離制備免疫后小鼠脾細胞來源的CD +8 T 細胞,將其與抗原肽融合性T2-Db 或Kb 細胞共同孵育,ELISPOT-IFN-γ 法和流式細胞術(shù)-CD3,CD8, IFN-γ,PD-1,顆粒酶B,TNF-α 法評價抗原肽的細胞免疫原性。Panc02 細胞皮下注射小鼠建立免疫治療性體內(nèi)腫瘤模型,疫苗尾基部皮下注射免疫小鼠,分離制備治療后CD +8 TIL,將其與抗原肽融合性T2-Db 或Kb 細胞共同孵育,采用ELISPOT-IFN-γ 法和流式細胞術(shù)-CD3,CD8, IFN-γ,PD-1 法評價抗原肽的細胞免疫原性; 采用Kaplan-Meier 曲線、腫瘤生長曲線評價疫苗抗腫瘤作用,流式細胞術(shù)-CD3,CD8,T-bet,PD1,Tim3,Lag3 法評價TIL 功能。結(jié)果顯示該疫苗可有效激活抗原肽特異性T 細胞,并可引起小鼠體內(nèi)移植瘤的消退; 其聯(lián)合2 種檢查點調(diào)節(jié)劑( 抗PD-1 和OX40 抗體) 可引起更強且持久的腫瘤消退并提高生存率[34]。