本試劑盒采用酶聯(lián)免疫方法(ELISA)檢測(cè)犬血清中的特異性抗狂犬病毒抗體,用于犬只免疫后抗體監(jiān)測(cè)。
【試劑組成】
1.預(yù)包被板 | 48T/96T; | | 8. 終止液(6號(hào)液) | 1支; |
2.酶結(jié)合物原液 | 2支; | | 9. 臨界對(duì)照品 | 1支; |
3.酶結(jié)合物稀釋液 | 2支; | | 10.陰性對(duì)照品 | 1支; |
4.洗滌液(PBST干粉) | 1/2包; | | 10.不干膠膜 | 1/2片; |
5.底物(3號(hào)液) | 1支; | | 11.自封袋 | 1個(gè); |
6.顯色液(4號(hào)液) | 1支; | | 12.使用說(shuō)明書(shū) | 1份; |
7.樣本稀釋液(5號(hào)液) | 1支; | | | |
【操作程序】
1. 酶結(jié)合物工作液配制:取1支酶結(jié)合物原液全部加入到1支酶結(jié)合物稀釋液中,充分混勻即可使用。
2. 洗滌液配制:每袋PBST干粉用蒸餾水500ml溶解混勻,即為洗滌液。
3. 加樣反應(yīng):每孔滴加樣品稀釋液2滴,加待檢樣品各5ul。每次試驗(yàn)需設(shè)陰性對(duì)照、臨界對(duì)照各2孔,空白孔1孔(陰性對(duì)照、臨界對(duì)照已稀釋?zhuān)囼?yàn)時(shí)可直接取100ul加入孔內(nèi),空白孔僅加2滴樣品稀釋液)。放置37℃20分鐘。傾去孔內(nèi)液體,將已配制好的洗滌液加滿(mǎn)每孔并靜置30秒鐘,傾去,甩干;共洗滌5次,拍干。
4. 加酶反應(yīng):除空白對(duì)照孔外,其余每孔加已稀釋的酶結(jié)合物2滴,置37℃ 20分鐘。然后如上洗滌。
5. 顯色反應(yīng):加底物(3號(hào)液)和顯色劑(4號(hào)液)各1滴,混勻,37℃下避光顯色10分鐘。加終止液(6號(hào)液)1滴,混勻,終止反應(yīng)后判讀結(jié)果。
【結(jié)果判斷】
以空白對(duì)照調(diào)零,用酶標(biāo)儀于450nm(630nm作參比波長(zhǎng))讀取吸光度(A值)。A值≥臨界對(duì)照均值為陽(yáng)性,說(shuō)明待檢樣品的抗體濃度≥0.5IU/ ml;低于者說(shuō)明待檢樣品的抗體濃度<0.5IU/ml。。
【注意事項(xiàng)】
1.試劑盒于2-8℃保存,有效期6個(gè)月。每次使用前應(yīng)先平衡至室溫。
2.未使用完的板條應(yīng)密封保存。已稀釋的酶結(jié)合物工作液應(yīng)盡快使用。
3.試劑盒中終止液具有腐蝕性,要小心使用。
4.瓶蓋每次使用后要擰緊,各瓶蓋之間不可混用。不同批號(hào)試劑盒的試劑組份不可混用。
5.試驗(yàn)樣本應(yīng)為無(wú)染菌、無(wú)血脂、無(wú)溶血的血清。任何樣本都應(yīng)視為傳染源妥善處理。
6. 37℃孵育時(shí),建議使用水浴箱。如無(wú)條件,可在溫箱中放置濕盒進(jìn)行反應(yīng)并同時(shí)用不干膠膜封蓋板孔。
特別提示:在使用酶結(jié)合物工作液之前,應(yīng)確保酶結(jié)合物原液已加入酶結(jié)合物稀釋液中并混勻!請(qǐng)?jiān)诠ぷ饕浩亢炆献⒚髋渲脮r(shí)間。
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