4Cell® NutriVero™Flex 10 培養(yǎng)基系統(tǒng)優(yōu)勢
本產(chǎn)品為化學(xué)成分限定的無血清、無動(dòng)物源成分培養(yǎng)基,其是由賽多利斯與致力于轉(zhuǎn)化疫苗學(xué)的研發(fā)機(jī)構(gòu)Intravacc聯(lián)合開
發(fā),其將為您提供一致的細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果,并幫助您對病毒生產(chǎn)工藝進(jìn)行更大限度的控制:
■ 生產(chǎn)效率:化學(xué)限定的高速細(xì)胞生長和高病毒滴度
■ 操作效率:簡化下游純化和過濾工藝,同時(shí)提高病毒生產(chǎn)能力
■ 安全且滿足監(jiān)管要求:降低工藝差異和污染風(fēng)險(xiǎn),以達(dá)到最佳安全性
4Cell® NutriVero™Flex 10 培養(yǎng)基系統(tǒng)產(chǎn)品信息
新開發(fā)的4Cell® NutriVero™Flex 10是一種化學(xué)成分限定的無血清、無動(dòng)物源成分培養(yǎng)基,主要用于支持Vero細(xì)胞在2D貼壁培養(yǎng)和3D微載體懸浮培養(yǎng)系統(tǒng)中的生長,并針對病毒的生產(chǎn)進(jìn)行了優(yōu)化。
化學(xué)成分限定的4Cell® NutriVero™Flex 10是-一種穩(wěn)定的培養(yǎng)基,只含重組成分,不含任何植物提取物(水解物),因此其可以提供一致的細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果。
應(yīng)用
Vero細(xì)胞系是日本的Yasumura和Kawakita在1962年從非洲綠猴的腎臟中分離出來的,可用于不同用途,其中最重要的一個(gè)用途就是基于細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)病毒疫苗。Vero細(xì)胞系因其病毒產(chǎn)量高且穩(wěn)定而得到廣泛使用,并且相對來說易于馴化,以在生物反應(yīng)器中的微載體上生長,這樣就可以獲得更高的疫苗純度和數(shù)量。
標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品特征
針對在貼壁2D單層細(xì)胞(圖1A)和3D微載體微珠(圖1B)Vero細(xì)胞生長驗(yàn)證4CellONutriVero"Flex 10培養(yǎng)基的性能。在兩個(gè)系統(tǒng)中,4Cell@NutriVero"Flex 10培養(yǎng)基顯示與含有未限定提取物(水解物)的對照培養(yǎng)基性能相當(dāng)。
圖1A.4Cell®NutriVero™Flex 10在Vero Cell 2D培養(yǎng)系統(tǒng)中的性能。
將Vero細(xì)胞以40000個(gè)細(xì)胞/cm2的細(xì)胞密度接種在T25搖瓶中,并在37°C、潮濕環(huán)境和5%CO2的條件下于4Cell®nutrio Vero™Flex 10培養(yǎng)基或參比對照基培養(yǎng)。
圖1B.3D培養(yǎng)系統(tǒng)中的Vero細(xì)胞生長密度
使用化學(xué)成分限定的4Cell® NutriVero™ Flex 10培養(yǎng)基和非化學(xué)限定對照培養(yǎng)基將兩個(gè)并列的生物反應(yīng)器填充到2L的工作體積攪拌速度設(shè)定在70-130rpm之間,溫度設(shè)定為37°C,pH值控制在7.2。在生物反應(yīng)器中接種 0.15 x 109 個(gè)細(xì)胞/L的細(xì)胞以及3g/L的微載體。
通過計(jì)算TCID50(50%組織培養(yǎng)感染劑量)指數(shù)進(jìn)行病毒定量。與含有未限定提取物(水解物)的對照培養(yǎng)基相比,4Cell®NutriVero™Flex 10培養(yǎng)基在支持2D單層細(xì)胞中Vero感染和病毒生產(chǎn)力(圖2A)以及在微載體珠粒中懸?。▓D2B)方面顯示出較高的性能。
圖2A.對限定的4Cell®NutriVero™Flex 10培養(yǎng)基病毒生產(chǎn)能力進(jìn)行初步評估。
將Vero細(xì)胞培養(yǎng)物以30000個(gè)細(xì)胞/cm2的細(xì)胞密度接種在6孔板上,而且該培養(yǎng)物感染了各種病毒:麻疹、薩賓脊髓灰質(zhì)炎1型病毒和 EV71-C4。7天后,培養(yǎng)物顯示CPE陽性,收集了上清液被并通過病毒滴定程序?qū)Ω腥绢w粒的數(shù)量進(jìn)行了分析。
圖2B.3D微載體培養(yǎng)系統(tǒng)中的腸道病毒71-C4的病毒生產(chǎn)
在1L生物反應(yīng)器中將Vero細(xì)胞以0.12 ± 0.03 x 106個(gè)細(xì)胞/ml 的濃度培養(yǎng)3天,濃度達(dá)到0.9 ± 0.2 x 106 個(gè)細(xì)胞/ml。接種66小時(shí)后,以7.55log10TCID50/ml的滴度感染EV71-C4細(xì)胞。感染后在規(guī)定的時(shí)間點(diǎn)取樣,并分析病毒滴度。