非洲豬瘟病毒核酸檢測試劑盒(恒溫可視法)
使用說明書
【產(chǎn)品說明】
本產(chǎn)品基于的恒溫可視化檢測技術,可針對血液、拭子樣本、脾臟等組織樣品中非洲豬瘟病毒的特異核酸片段進行
擴增,通過顏色變化判讀結果。
【貨 號】 YRMBV7301
【包裝規(guī)格】 50 Tests/kit
【試劑盒組成】
【儲存條件及有效期】
非洲豬瘟反應液 A 可 4℃保存 1 周,超過 1 周建議-20℃保存,并避免反復凍融 8 次以上。
樣品前處理液、非洲豬瘟反應液 B、非洲豬瘟陰性對照、非洲豬瘟陽性對照和密封液可 4℃保存一個月,長期保存需要-20℃。
避光-20℃貯存,有效期均為 12 個月。(請于有效期內使用)
【適用儀器】
恒溫孵育器(適配 PCR 管)。
【樣品采集】
1. 抗凝血樣品:用真空(EDTA 抗凝的真空)采集 5mL 血液,備用。
2. 血清樣品:采集 5mL 血液樣品,室溫靜置凝固后收集血清,備用。
3. 組織樣品:脾臟,其次為扁桃體、淋巴結、腎臟、骨髓、肌肉等,剪取 10g 左右樣品,裝入無菌袋,備用。
4. 樣品:采用商品化拭子采樣管,棉拭子采集樣品后,放入拭子保存管中,備用。
注:樣本如不能馬上檢測,可短期冷藏(2-8℃)保存,如需運輸要冷藏運輸。長期保存需冷凍保存。
【檢測步驟】
一、DNA 提取(樣本制備區(qū))
1、全血或血清樣品。直接取 20μL 樣本于 1.5mL 離心管中,加入 100μL 樣品前處理液,混勻,100℃加熱 5 分鐘后,取出立
即 10000rpm 離心 1 分鐘,上清即為樣本模板。
★ 注意:對于全血樣品,加熱之后需立即離心,否則影響離心分離效果,*終影響結果的準確性。
2、新鮮組織樣品(如脾臟等)。取 20mg 剪碎的組織樣品于 1.5mL 離心管中,加入 100μL 生理鹽水勻漿。取 20μL 勻漿后的
樣本,加入 100μL 樣品前處理液,混勻,100℃加熱 5 分鐘后,10000rpm 離心 1 分鐘,上清即為樣本模板。
3、拭子樣品(如)。取 20μL 拭子保存液(或者拭子洗滌液)于 1.5mL 離心管中,加入 100μL 樣品前處理液,混勻,
100℃加熱 5 分鐘后,5000rpm 離心 4 分鐘或者 10000rpm 離心 1 分鐘,上清即為樣本模板。
試劑 規(guī)格及數(shù)量 存儲條件
樣品前處理液 1800 μL/管×3 4°C
非洲豬瘟反應液 A 50μL/管 -20°C
非洲豬瘟反應液 B 1100 μL/管 -20°C
非洲豬瘟陽性對照 100 μL/管 -20°C
非洲豬瘟陰性對照 100 μL/管 -20°C
密封液 1000 μL/管 -20°C第 2 頁 共 2 頁
★ 注意:樣品前處理液使用時必須吹打均勻,否則影響提取效果。
二、試劑配制
N 個待檢樣品,則參照下表,按照 N+3 個數(shù)量計算各組分用量(N 個待檢樣品+1 個陰性對照+1 個陽性對照,多配一個
反應確保反應液分裝體積的準確),將反應液置于 1.5ml 離心管中,渦旋混勻或者蓋上蓋子上下顛倒混勻 10-20 次,離心 30
秒,每個 PCR 管分裝 23μL,并向每管加入 1 滴密封液(約 20μl)。
試劑 使用量
非洲豬瘟反應液 A 1×(N+2)μL
非洲豬瘟反應液 B 22×(N+2)μL
反應液總體積 23×(N+2)μL
三、添加模板
向 PCR 管中分別加入 2μl 模板,順序為陰性對照(陰性對照管可不加入模板)、待測樣品模板、陽性對照。蓋緊管蓋,
離心 30 秒,立即進行擴增反應。
四、擴增反應(擴增及產(chǎn)物分析區(qū))
恒溫儀器 65℃條件下反應 40 min。
【結果判定】
在一個光線良好的環(huán)境(手機拍照開手電筒,效果更好)中觀察反應液顏色(建議以白紙為背景)。如果溶液顏色仍為紫
色,則判定為非洲豬瘟病毒核酸陰性;如果溶液顏色變成天藍色,則判定為非洲豬瘟病毒核酸陽性,結果如下。
★ 陰性對照反應管結果為“陰性”,陽性對照反應管結果為“陽性”,此次檢測結果有效,否則無效。如重復檢測結果仍為
無效,請與技術支持人員聯(lián)系。
【注意事項】
1、本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染,實驗要分區(qū)操作。
1)一區(qū):試劑準備區(qū);2)第二區(qū):樣本制備區(qū);第三區(qū):模板添加區(qū);第四區(qū):擴增及產(chǎn)物分析區(qū)。
★ 分區(qū)之間*進行物理性隔離,避免人為因素造成的污染。
2、實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套,不同區(qū)域獨立使用工具,需更換手套和實驗服。
3、嚴格按照操作步驟操作,試劑配制和加樣步驟建議在冰盒上操作。如無冰盒,配好反應后,立即加入樣品進行檢測。
4、反應液中的成分對光敏感,應避光保存。試劑使用前要解凍,但應避免反復凍融,推薦使用前離心 30 秒,并按檢測
頻次將反應液以適當體積分管保存。
5、★反應結束后,擴增管請置于密封袋內丟棄,當日清理,開蓋易造成氣溶膠污染,禁止開蓋。
6、不同批號試劑請勿混合使用,在有效期內使用。
7、試劑盒僅用于科研用途。
原創(chuàng)作者:廈門科朋儀器有限公司