含 EmGFP 的 BLOCK-iT™ 誘導型 Pol II miR RNAi 表達載體試劑盒。

BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表達載體試劑盒兼具了傳統(tǒng) RNAi 載體的優(yōu)勢（穩(wěn)定表達和使用病毒遞送的能力）與組織特異性表達和同一轉(zhuǎn)錄物中多次靶標基因敲低能力。BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表達載體試劑盒和 BLOCK-iT™ 慢病毒 Pol II miR RNAi 表達系統(tǒng)設計用于表達人工 miRNA，其經(jīng)基因工程改造后具有靶序列 99% 同源性，將導致靶標切割。使用 Invitrogen’ 優(yōu)質(zhì) BLOCK-iT™ RNAi Designer，70% 以上的構(gòu)建體產(chǎn)生超過 70% 的敲低。Invitrogen Pol II 表達載體家族包括：

–CMV 立即早期啟動子的強表達，可選擇通過 MultiSite Gateway™ 重組使用組織特異性或其他調(diào)節(jié)啟動子。
–與許多用于基因表達的 Invitrogen’ Gateway™ 目的 (DEST) 載體的兼容性。

–使用新的 BLOCK-iT™ 誘導型 Pol II miR RNAi 表達載體試劑盒（含 EmGFP）控制 RNAi 響應啟動的能力。
–含 EmGFP 的 BLOCK-iT™HiPerform™ 慢病毒 PolII miR RNAi 表達系統(tǒng)中一種新的目的載體。新載體含有一個 mRNA 穩(wěn)定序列 (WPRE) 和一個核導入序列 (cPPT)，可產(chǎn)生高達 5 倍的病毒滴度和 EmGFP 表達水平。此外，從小鼠 Pgk-1 啟動子中表達殺稻瘟菌素抗性，以避免多次傳代后關(guān)閉。

–祖母綠 GFP (EmGFP) 的協(xié)同順反子表達，導致 EmGFP 表達與 miR RNAi 敲低相關(guān)。

–在同一轉(zhuǎn)錄物上表達一個以上的經(jīng)基因工程改造 miR RNAi 序列，允許同時敲低多個基因并產(chǎn)生合成表型

新的含 EmGFP 的 BLOCK-iT™ 誘導型 Pol II miR RNAi 表達載體試劑盒提供了調(diào)節(jié) RNAi 實驗的能力。該試劑盒含有 pT-REx-DEST30 Gateway™ 載體，在簡單克隆和穿梭技術(shù)后，產(chǎn)生適用于誘導型敲低的 miR RNAi 表達載體。pT-REx-DEST30 Gateway™ 載體包含帶有兩個四環(huán)素操縱基因 (tetO2) 序列拷貝的 CMV 啟動子，允許高水平和調(diào)節(jié)表達。這允許在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系中進行功能喪失研究，即使目的基因是必需的也可進行研究。此外，在基因功能恢復期間，可以停止 miR RNAi 表達的誘導，因此可以測量表型變化。

對于多種表達選項，包含 EmGFP（僅 pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR 載體）、miR 側(cè)翼區(qū)和與目標靶標同源的 miRNA 的 miR RNAi 盒可輕松地轉(zhuǎn)移到多種 DEST 載體中。這通過 Gateway™ 重組反應發(fā)生，在該反應中，將 miR RNAi 盒轉(zhuǎn)移至 pDONR™ 載體中（BP 反應），然后轉(zhuǎn)移至 DEST 載體中（LR 反應）。HiPerform™ 系統(tǒng)具有用于高病毒滴度和 EmGFP 表達的新 pLenti6.4/RF R2/V5-DEST 目的載體。