特點:
高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴增;
高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100;
操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進(jìn)行多個檢測;
高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
產(chǎn)品名稱 | 傳染性膿皰皮炎病毒PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 | Contagious Pustular Dermatitis Virus(CPDV )PCR |
分類 | PCR檢測試劑盒 |
樣品 DNA 的制備:
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
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使用及效果:
PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
人異質(zhì)核核糖A2/B1(hnRNPA2/B1)ELISA試劑盒120926-46-710mg Isoliquiritin apioside 0.312-20 ng/mL芹糖異甘草苷
LFA-3/CD58抗體(PE),兔單抗85643-19-2C22H26O11Curculigoside≥98%FCM 仙茅苷
ELISAKitforHumanHeatshockfactorprotein1172104-04-010mg Uvarigranol C 0.312-20 ng/mL大花紫玉盤C
EC-MUG培養(yǎng)基(100g)10MG 100gADPG腺苷二磷酸葡萄糖
人金屬硫蛋白1E(MT1E)ELISA試劑盒10mg 0.47-30 ng/mL5,7-二氧基芹菜定 DIMETHOXYAPIGENINIDIN, 5,7-(SH)
營養(yǎng)瓊脂/普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基/NA066-06181一般細(xì)菌培養(yǎng)四丁基雙(三?;﹣啺?47718-93-4
ELISAKitforHumanSortingnexin-14 x 10mg 78-5000 pg/mL朝鮮薊標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 ARTICHOKE STANDARDS KIT(P)
人分泌載體相關(guān)膜蛋白1(SCAM1)ELISA試劑盒1g 78-5000 pg/mL膽甾硬脂酸酯 CHOLESTERYL STEARATE(RG)
CD86/B7-2抗體(PE),鼠單1mgFCM 日本八角茴香果提取物#1 Japanese Star Anise (Illicium anisatum) Fruit Extract #1 BXL(REQUEST QUOTE)
藍(lán)舌病病毒(BTV)核酸檢測試劑盒5986-55-0 20mgPatchouli alcohol HPLC≥98% 78-5000 pg/mL百秋李;虎尾草; 廣藿香
H2AFM/HIST1H2AB抗體,兔多抗,抗原親和純化 106-40-1 500mg 0.999WB 4-溴苯胺
ELISAKitforHumanCytochromeP4502C1965995-64-410mg Punicalin 7.8-500 ng/mL石榴皮鞣素
CER1/Cerberus1抗體,兔多抗58812-37-6C30H38O11Toosendanin HPLC≥98%ELISA 川楝素
人IgE-Fc片段受體Ⅱ(FcεRⅡ)ELISA試劑盒86639-62-510mg 9-Nitrocamptothecin 1.56-100 ng/mL9-硝基喜樹堿
人卵巢癌標(biāo)志物/糖抗原125(CA125)ELISA試劑盒25mg 3.12-200 U/mL5α-孕烷-3α,20α-二 ALLOPREGNANEDIOL(RG)
ELISAKitforLipoarabinomannan500mg 0.312-20 ng/mL11-羰基-β-乙酰香酸 ACETYL-11-KETO-B-BOSWELLIC ACID, 3-(RG)
傳染性膿皰皮炎病毒PCR檢測試劑盒1,3-二咖??鼘幩?洋薊素;洋薊酸;朝鮮薊酸;朝薊素;菜薊素 HPLC≥98% Cynarin; 1,5-Dicaffeoylquinic acid 人卵巢腺癌細(xì)胞,OVCAR-3細(xì)胞 用于含量測定
鳶尾苷A 10mg Iristectorin A ELISAKitforHumanInhibinbetaAchain
4-氯芐溴 4-Chlorobenzyl Bromide >97.0%(GC) 5G ELISAKitforHumanTranscriptionalactivatorMyb
N,N-二(2-羥乙基)甘氨酸[生物研究用Good's緩沖液中的成分] N,N-Di(2-hydroxyethyl)glycine [Good's buffer component for biological research]>99.0%(T) 500G 人哆/哆維生素B6激酶(PDXK)ELISA試劑盒
地黃苷D C27H42O20 Rehmannioside D ASAM/CLMP抗體,兔多抗,抗原親和純化 HPLC≥98%
Target tag/PA tag 重組蛋白純化系統(tǒng) 162-26911 葡萄糖銨
日本八角茴香果提取物#5 Japanese Star Anise (Illicium anisatum) Fruit Extract #5 BXL(REQUEST QUOTE) 1mg CEACAM8/CD66b/CD67抗體(APC),鼠單抗
焦地黃苯乙甙B1 5mg Jionoside B1 ELISAKitforHumanHeterogeneousnuclearribonucleoproteinF