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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS6321125 | 羧酸酯酶(CarE)測(cè)試盒(比色法) | 100管/96樣 |
AS6321125 | 羧酸酯酶(CarE)測(cè)試盒(比色法) | 50管/48樣 |
測(cè)定意義:
哺乳動(dòng)物CarE,也稱脂族酯酶(aliesterase),廣泛分布于組織和器官。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內(nèi)源性與外源性物質(zhì)水解,但不能催化水解乙酰及其類似物。CarE參與脂質(zhì)運(yùn)輸和代謝,并且與多種藥物、環(huán)境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關(guān),有機(jī)磷農(nóng)藥可結(jié)合并且抑制CarE活性。
測(cè)定原理:
CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固籃顯色;在450 nm光吸收增加速率,計(jì)算CarE活性。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
試劑組成和配置:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體15mL×2瓶, 4℃保存;
試劑三:粉劑×2支, 4℃保存,臨用前取1支試劑三,加0.6ml無水乙醇充分溶解;
試劑四:粉劑×2支,-20℃保存,臨用前取1支試劑四,加少量試劑二溶解;
工作液配制:臨用前配制,向1瓶試劑二中,加入溶解后的試劑三和試劑四各1支,充分溶解,過濾,4℃避光保存,可用1周。
粗酶液提取:
細(xì)菌、細(xì)胞樣品制備
收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL試劑一,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);12000g 4℃離心30min,取上清液待測(cè)。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿;12000g 4℃離心30min,取上清液待測(cè)。
3、液體:直接測(cè)定
測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到450 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管:取微量玻璃比色皿/96孔板,依次加入5μL蒸餾水和200μL試劑二,迅速混勻,于450nm處測(cè)定3min內(nèi)吸光值變化,第10s吸光值記為A1,第190s吸光值記為A2?!鰽空白管=A2-A1
4. 測(cè)定管:取微量玻璃比色皿/96孔板,依次加入5μL上清液和200μL試劑二,迅速混勻,于450nm處測(cè)定3min內(nèi)吸光值變化,第10s吸光值記為A3,第190s吸光值記為A4。△A測(cè)定管=A4-A3
注意:空白管只需測(cè)定一次。
CarE活性計(jì)算公式:
使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1 組織中CarE活性
按蛋白濃度計(jì)算
CarE活性單位定義:每mg組織蛋白在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。
CarE酶活(U/mg prot)= (△A測(cè)定管-△A空白管) ×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
= 13.67×(△A測(cè)定管-△A空白管)÷Cpr
按樣本鮮重計(jì)算
CarE活性單位定義:每g組織在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。
CarE酶活(U/g 鮮重)= (△A測(cè)定管-△A空白管) ×V反總×(V樣總÷V樣)÷W÷T
=13.67×(△A測(cè)定管-△A空白管)÷W
2 細(xì)菌或細(xì)胞中CarE活性
CarE活性單位定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為一個(gè)CarE活性單位。
CarE酶活(U/104 cell)= (△A測(cè)定管-△A空白管) ×V反總×(V樣總÷V樣)÷細(xì)胞密度(104 cell/mL)÷T=13.67×(△A測(cè)定管-△A空白管)÷細(xì)胞密度(104 cell/mL)
3. 液體中CarE活性
CarE活性單位定義:每毫升樣品在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。
CarE酶活(U/mL )= (△A測(cè)定管-△A空白管) ×V反總÷V樣÷T
=13.67×(△A測(cè)定管-△A空白管)
V反總:反應(yīng)體系總體積,205μL=2.05×10-4L;V樣總:上清液總體積,1 mL;V樣:加入上清液體積(mL),0.005 mL;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量(g);T:反應(yīng)時(shí)間(min),3min。
使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1 組織中CarE活性
按蛋白濃度計(jì)算
CarE活性單位定義:每mg組織蛋白在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。
CarE酶活(U/mg prot)= (△A測(cè)定管-△A空白管) ×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
= 13.67×(△A測(cè)定管-△A空白管)÷Cpr
按樣本鮮重計(jì)算
CarE活性單位定義:每g組織在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。
CarE酶活(U/g 鮮重)= (△A測(cè)定管-△A空白管) ×V反總×(V樣總÷V樣)÷W÷T
=13.67×(△A測(cè)定管-△A空白管)÷W
2 細(xì)菌或細(xì)胞中CarE活性
CarE活性單位定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為一個(gè)CarE活性單位。
CarE酶活(U/104 cell)= (△A測(cè)定管-△A空白管) ×V反總×(V樣總÷V樣)÷細(xì)胞密度(104 cell/mL)÷T=13.67×(△A測(cè)定管-△A空白管)÷細(xì)胞密度(104 cell/mL)
3. 液體中CarE活性
CarE活性單位定義:每毫升樣品在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。
CarE酶活(U/mL )= (△A測(cè)定管-△A空白管) ×V反總÷V樣÷T
=13.67×(△A測(cè)定管-△A空白管)
V反總:反應(yīng)體系總體積,205μL=2.05×10-4L;V樣總:上清液總體積,1 mL;V樣:加入上清液體積(mL),0.005 mL;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量(g);T:反應(yīng)時(shí)間(min),3min。
公司正在出售的產(chǎn)品:
CHAc ELISA Kit | ATP合mei8ELISA試劑盒 |
Anti-P62 Antibody(AP62A)ELISA Kit | Citron蛋白ELISA試劑盒 |
CD109分子ELISA試劑盒 | Derlin1蛋白ELISA試劑盒 |
Cullin4B蛋白ELISA試劑盒 | G補(bǔ)綴FHA域血管生成因子1ELISA試劑盒 |
大鼠前列腺特異性抗原(PSA)試劑盒 ELISA | 大鼠補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISA試劑盒 |
腺苷suan環(huán)化mei8ELISA試劑盒 | 人組織蛋白meiC(CTSC)檢測(cè)試劑盒elisa |
人白介su4(IL-4)ELISA試劑盒 | Egl九同源物1ELISA試劑盒 |
雞蛋卵黃高磷蛋白磷suan肽(PPP)試劑盒elisa | 綿羊星狀病毒2型RT-PCR試劑盒 |
花生PCR檢測(cè)試劑盒 | 胎兒彎曲桿菌性病亞種PCR檢測(cè)試劑盒 |
刺激隱核蟲PCR試劑盒 | 麝源性成分PCR試劑盒 |
奔馬赭霉PCR檢測(cè)試劑盒 | 虎杖探針法PCR鑒定試劑盒 |
肥胖帶絳蟲PCR檢測(cè)試劑盒 | MDA 大鼠丙二醛ELISA檢測(cè)試劑盒 |
BNP 猴子腦鈉su/腦鈉尿肽ELISA檢測(cè)試劑盒 | 虎源性成分PCR試劑盒 |
BMPR-Ⅱ 大鼠骨成型蛋白受體ⅡELISA檢測(cè)試劑盒 | 索氏梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒 |
型受體β1(CHRNβ1)ELISA試劑盒 | BLI 人β內(nèi)酰胺抑制劑ELISA檢測(cè)試劑盒 |