小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子（KAF）/雙調(diào)蛋白（AR）ELISA試劑盒

試劑盒名稱：小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子（KAF）/雙調(diào)蛋白（AR）ELISA試劑盒

檢測(cè)用所有試劑全部都為進(jìn)口試劑，適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本，靈敏度*，多年專業(yè)酶免服務(wù)，我們保證對(duì)所售任何產(chǎn)品一概負(fù)責(zé)到底，每一份實(shí)驗(yàn)結(jié)果都真實(shí)可靠！各檢測(cè)項(xiàng)目酶免（ELISA）試劑盒具備,*,定貨及時(shí),送貨上門.此外,我公司還提供樣本代測(cè)服務(wù)。

規(guī)格：48T/96T

小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子（KAF）/雙調(diào)蛋白（AR）ELISA試劑盒 組織樣品前處理：
①1g組織切碎后加5倍體積的TBS，用均質(zhì)器均質(zhì)（10次）。 組織勻漿5000×g，4℃離心20分鐘
TBS：50 mmol/L Tris-HCl ,  pH 7.6, 150 mmol/L NaCl ,  蛋白酶抑制劑 [0.1 mmol/L 二異丙基氟磷酸鹽 , 0.5 mmol/L 苯甲磺酰氟 , 1 g/mL甲苯磺酰-L-賴氨酸氯甲基酮鹽酸鹽, 1 g/mL抗痛素, 0.1 g/mL亮肽素]
②沉淀物懸浮與5倍體積的TBA/蛋白酶抑制劑（含1 mol/L蔗糖），5000×g，4℃離心20分鐘。
③沉淀物中加入3倍體積的1％Triton X-100/TBS/蛋白酶抑制劑，勻質(zhì)（10次）。37℃孵育15分鐘后，5000×g離心20分鐘。
④沉淀物和勻質(zhì)物中加入3倍體積的2％SDS/TBS/蛋白酶抑制劑到。組織勻漿37℃孵育15分鐘后，500000×g 25℃離心。
⑤沉淀物中加1mL 70％蟻酸到，超聲破碎后5000×g 4℃離心
⑥收集上清液并用離心濃縮（Speed Vac）干燥。加100μL DMSO并短時(shí)超聲破碎成懸液。零下80℃儲(chǔ)存這個(gè)DMSO－蟻酸溶解的改組織溶液直到使用。
⑦檢測(cè)時(shí)，依照說(shuō)明書所寫，用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液溶解樣本。

操作步驟：
實(shí)驗(yàn)開始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60分鐘。
溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4. 每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

產(chǎn)品訂購(gòu)說(shuō)明：
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日價(jià)格為準(zhǔn)。
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過(guò)截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。