酸性肉湯 價格
【一般貯存】必須防潮、避光、陰涼處保存
【組織培養(yǎng)基貯存】較長時間的貯存,必須放在2~6℃的冰箱內(nèi)
【注意事項】:由于液體培養(yǎng)基不易*保管,現(xiàn)在均改制成粉末。
【貯存方法】:培養(yǎng)基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細菌污染或分解變質,因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基),較長時間的貯存,必須放在2~6℃的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易*保管,現(xiàn)在均改制成粉末。
【常見培養(yǎng)基有】:細菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、微藻培養(yǎng)基、真菌培養(yǎng)基、食用菌菌種培養(yǎng)基、煙草的培養(yǎng)基、動物細胞培養(yǎng)基
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培養(yǎng)基是根據(jù)微生物生長繁殖的營養(yǎng)需要,用人工方法配置而成的培養(yǎng)基質,其中還有水、碳源、無機鹽及各種生長因子,培養(yǎng)基可為微生物的生長提供能源、組成菌體的原料,調(diào)節(jié)代謝活動。
不同微生物對營養(yǎng)物質的要求各不相同,因此,配置培養(yǎng)基要根據(jù)微生物的營養(yǎng)特點。一般培養(yǎng)細菌常用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,培養(yǎng)放線菌常用淀粉培養(yǎng)基,培養(yǎng)霉菌常用馬鈴薯培養(yǎng)基。
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1)母液配制必須嚴格分類
配制高濃度的母液是植物組織培養(yǎng)的基本功。配制母液的目的,除了多次取用、節(jié)省實驗準備的時間外,還有抑制雜菌生長的作用。高濃度的母液能夠有效地抑制細菌與霉菌的生長,加上低溫環(huán)境 ( 4℃) ,能夠大大增加培養(yǎng)基的存放時間( 一年左右 ) 。一般而言,培養(yǎng)基中的各個成分可以按照表1的分類方式配成母液。
伊紅美藍瓊脂(EMB)4℃避光保存,用時按照母液倍數(shù)進行稀釋即可。
母液分類的依據(jù),是要避免MS培養(yǎng)基中某些成分發(fā)生沉淀反應。例如,如果將全部的大量元素混合在一起配制,則KH2PO4和CaCl2 易產(chǎn)生Ca3( PO4)2沉淀,而CaC12和MgSO4 將生成CaSO4 沉淀。
除上述成分外,還必須加上蔗糖、瓊脂以及激素,才構成用于組織培養(yǎng)的MS培養(yǎng)基。
2)激素的溶解方法
MS培養(yǎng)基中常用的激素,如2,4 - D、NAA、6-BA,也要配制成 10~20倍母液,這樣便于稱量(激素的用量極小,給稱量造成不便),且可以多次取用。激素的配制與一般的藥品不同,需要助溶劑。
如要配制 10 mL的 1mg/mL 2,4- D母液,則應稱取0.01g 2,4 - D固體,置于小燒杯中, 再以 1~3 mL的95%乙醇(或 0.1 mo l/L NaOH) 溶解,zui后緩慢加入蒸餾水定容。即每加入1 mL蒸餾水,立即攪拌均勻,使白色沉淀消失。重復數(shù)次,直至定容 。
一般而言,生長素類物質2,4-D、 N AA) 要用95%乙醇(或0.1 mo l/L NaOH)助溶,而細胞分裂素類物質(如6-BA)要用0.1 mo l/L的HC1助溶。助溶劑的用量一定要小,不能因其溶解效果好而過量使用,否則將影響培養(yǎng)基的質量(改變培養(yǎng)基成分或 pH值) 。配制好的激素要常溫避光保存,盡快使用(盡量不超過一個月)。將激素母液保存在 4 ℃冰箱中, 希望獲得較長的保存時間。但事實上這種做法是不可取的,因為激素在低溫環(huán)境中易析出沉淀,影響使用效果
3)危險藥品的使用與保管
盡管組織培養(yǎng)技術已經(jīng)相當成熟,也很普及,但該技術并不安全。除注意滅菌鍋、超凈臺等大型儀器的使用安全外 ,zui重要的當屬危險藥品的使用與保管。原則上,MS培養(yǎng)基中任何一種藥品都有一定的危險性?,F(xiàn)只把zui突出、zui需要預防的藥品注釋如下。
( 1 ) NH4NO3、 KNO3
此兩種藥品為易爆品,取用時一定要輕拿輕放,保存在陰涼處。另外,目前NH4NO3,的購買受到一定的限制,也可以考慮使用其他培養(yǎng)基,如N6或B5培養(yǎng)基,無 NH4 NO3成分,亦為組織培養(yǎng)所常用。
(2) EDTA- Na2 、CoC12、 2,4-D 此三種藥品為致癌物,配制時要帶膠皮手套,或兩層塑料手套。EDTA-Na為金屬螯合劑,有一定的粘性;CoCl2能夠導致基因突變,遺傳學實 驗中也常用其作為致突變劑;2,4 - D是高效農(nóng)藥,對人的皮膚有傷害作用。
4)熱水定容原則
在母液、激素、蔗糖、瓊脂都加入后,很多人習慣用微波爐或電磁爐加熱溶解培養(yǎng)基(特別是瓊脂) 。培養(yǎng)基熔化后,由于水分的蒸發(fā),會造成體積的減少,從而需要定容。這時一定要用熱水( 60℃左右) 進行定容,切忌用冷水( 30℃以下),否則培養(yǎng)基中局部的瓊脂將凝 固,造成營養(yǎng)成分濃度不均。
5)關于調(diào)節(jié) p H
適合的p H保證了營養(yǎng)成分的正常發(fā)揮,也決定了培養(yǎng)基的硬度(偏酸則過軟,偏堿則過硬,都不利于組織的生長) ,故要十分留意。對于MS 培養(yǎng)基而言,只要各個成分按照用量精確加入,并且在熔化培養(yǎng)基時加熱時間適合( 平均100 mL培養(yǎng)基加熱60~90s , 保證*熔化的同時,盡量限制加熱時間) ,則培養(yǎng)基的pH自然地將處于zui適范圍內(nèi)。調(diào)解 pH時用電子pH計,以保證精確度。pH試紙的誤差較大,要小心調(diào)節(jié)??梢詫H調(diào)到比zui適值小一些,因為培養(yǎng)基在滅菌后,p H將變大。