重組蛋白A/G預裝柱rProtein A/G

通過基因重組技術，將蛋白A與蛋白G基因重組于同一質(zhì)粒載體中，并在大腸桿菌中進行表達，得到分子量為50.5KDa的可溶性蛋白A/G。該可溶性蛋白A/G具有四個IgG結(jié)合位點，來自于蛋白A；和...

重組蛋白A/G預裝柱規(guī)格

目錄號	規(guī)格	產(chǎn)品形式
rP A/G-001	1mL	預裝柱
rP A/G-002	5mL	預裝柱
rPA/G-005	5mL	填料
rPA/G-025	25mL	填料
rPA/G-100	100mL	填料

生產(chǎn)批次：見產(chǎn)品標簽
有效期：4℃長期存放，有效期三年

重組蛋白A/G預裝柱簡介

產(chǎn)品簡介

通過基因重組技術，將蛋白A與蛋白G基因重組于同一質(zhì)粒載體中，并在大腸桿菌中進行表達，得到分子量為50.5KDa的可溶性蛋白A/G。該可溶性蛋白A/G具有四個IgG結(jié)合位點，來自于蛋白A；和兩個IgG的結(jié)合位點，來自于蛋白G。因具有上述特性，使得基因工程重組蛋白A/G具有廣泛的IgG的結(jié)合能力，對各種哺乳類動物的IgG都能結(jié)合，使得該產(chǎn)品在IgG的診斷和純化中具有十分廣泛的用途。
本產(chǎn)品采用“高配基、高濃度、小體積”的創(chuàng)新偶聯(lián)技術，將填料中有限的羥基(-OH)結(jié)合位點充分活化，使得單位體積中結(jié)合更多蛋白A/G，產(chǎn)品最終純化效率較普通偶聯(lián)有30%的提高。蛋白A或蛋白G、蛋白A/G偶聯(lián)填料可直接用于血清、腹水中IgG抗體純化，或用于含F(xiàn)c片段的重組蛋白的純化。

產(chǎn)品技術指標

rec-Protein A/G per Sepharose 4FF 比值：
4.0-4.5mg rec-Protein A/G per ml Sepharose 4FF
結(jié)合能力：
35-50mg人IgG / ml填料
38-51mg兔IgG / ml填料
5.5-18.5mg鼠血清IgG/ml填料
4.5-17.8mg鼠腹水IgG/ml填料
rec-Protein AG分子量：
50.5 KDa
每分子rec-Protein G可結(jié)合IgG位點數(shù)：
6個（4個來自于蛋白A，2個來自于蛋白G）
rec-Protein A可結(jié)合白蛋白位點數(shù)：
無
線性流速：
300-500 cm/h
耐壓指數(shù)：
0.3 MPa

產(chǎn)品保存

產(chǎn)品儲存于2-8℃

rProtein A/G-Sepharose 4FF純化IgG抗體步驟

以下方法適用于從血清或腹水中純化IgG抗體，不同來源的IgG與rProteinA/ G的結(jié)合能力不同，具體情況請參考表1。
1. 將血清或腹水樣品（推薦上樣量2 mL樣品/mL柱）裝入截留分子量3.5 KDa透析帶中，于4 ℃冰箱中對1× PBS（pH 7.4）透析過夜；
2. 將rProtein A/G-Sepharose 4FF裝柱固定好，用10倍柱體積1× PBS（pH 7.4）平衡層析柱，建議流速為1 mL/min；
3. 將透析好的樣品從層析柱上端加入，建議流速為1 mL/min，為了獲得更好的抗體結(jié)合效果可將流穿液再上樣，重復2遍（或者是將樣品1次性加入層析柱后置于搖床上，輕輕搖動，結(jié)合30 min）；
4. 樣品結(jié)合后，用20倍柱體積1× PBS(pH 7.4)洗滌層析柱，建議流速為1 mL/min，勿讓層析柱滴干；
5. 洗脫IgG，向?qū)游鲋隙思尤胂疵撘海?00 mM甘氨酸，pH 2.7），用預先加有100 μL中和緩沖液（1M Tris，pH 9.0）的4 mL Ep管接收，2 mL /管，共收集10倍柱體積，進行10 % SDS-PAGE電泳，確定IgG樣品所在管，回收樣品。
6. 加入5倍柱體積再生緩沖液（100 mM甘氨酸，pH 2.0），再加入10倍柱體積ddH2O清洗層析柱。 向?qū)游鲋尤?0倍柱體積, 20% Ethanol，于4~8 ℃冰箱。

表1 rProtein A/G 與Ig結(jié)合能力情況

IgG類型	Protein A	Protein G	IgG類型	Protein A	Protein G
人 IgG1	++++	++++	大鼠 IgG2b	-	++
人 IgG2	++++	++++	大鼠 IgG2c	+	++
人IgG3	-	++++	大鼠 IgM	+/-	-
人IgG4	++++	++++	兔 Ig	++++	+++
人IgA	++	-	雞 Ig	-	+
人n IgD	++	-	倉鼠 Ig	+	++
人IgE	++	-	豚鼠 Ig	++++	++
人 IgM	++	-	牛 Ig	++	++++
小鼠 IgG1	+	++++	馬	++	++++
小鼠 IgG2a	++++	++++	奶牛	++	++++
小鼠 IgG2b	+++	+++	豬	+++	+++
小鼠 IgG3	++	+++	綿羊	+/-	++
小鼠 IgM	+/-	-	山羊	-	++
大鼠 IgG1	-	+
大鼠 IgG2a	-	++++

表2 rProtein A/G預裝柱系列產(chǎn)品參數(shù)

特性	rProtein A/G	特性	rProtein A
柱體積規(guī)格	1mL，5mL	填料穩(wěn)定性	＞20純化周期
基質(zhì)組成	4%高交聯(lián)度瓊脂糖	pH穩(wěn)定性	pH 2~11
基質(zhì)平均粒徑	90μm	推薦工作pH范圍	pH 3~10
功能集團	rProtein A/G：50.5kDa； IgG結(jié)合位點：6個	推薦在位清洗pH范圍	pH 2~11
配基密度	≈3mg rProtein A/mL 基質(zhì)	工作溫度	4~40℃
結(jié)合能力	35-50mg人IgG/mL填料	運輸條件	20%乙醇浸泡，室溫運輸
推薦流速	30~150cm/mL	貯藏條件	20%乙醇條件下， 4~8℃保存